目的:通过构建Bmal1基因不同表达状态的鼻咽癌细胞株CNE1,对比放疗前后通路相关蛋白表达水平变化情况,从分子水平上探讨放疗后生物钟基因Bmal1能否通过ATM/ATR通路调控细胞周期相关蛋白及其作用机制。方法:构建鼻咽癌细胞株CNE1,通过慢病毒载体转染构建Bmal1基因过表达组,其空载体转染为对照组,在过表达组中加入ATM/ATR通路抑制剂KU55933作为抑制剂组,将未做处理的CNE1细胞株作为空白组。免疫共沉淀法(Co-immunoprecipitation,Co-iP)检测Bmal1基因与ATM/ATR通路检查点的相互作用。蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测Bmal1基因在蛋白水平过表达的效果及ATM、ATR、chk1、chk2、p-chk1、p-chk2、P53、P21、CDC25A、CDC25C、WEEL、Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6等ATM/ATR通路相关蛋白表达水平。结果:WB结果表明,相比于空白组、对照组,过表达组中Bmal1基因表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而在空白组和对照组中Bmal1基因表达无显著差异性(P>0.05)。Co-iP证实放疗前后Bmal1基因与ATM/ATR通路检查点ATM、ATR、chk1、chk2基因间存在相互作用。相比于空白组、对照组,放疗前过表达组中ATM/ATR通路上游基因ATM、ATR、chk1、p-chk1、p-chk2、P53蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),而chk2蛋白表达在三组间无明显差异(P>0.05);放疗后过表达组中通路上游基因P53、P21、p-chk1、p-chk2蛋白表达显著升高,下游基因CDC25A、CDC25C、Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、WEEL蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。比较过表达组和抑制剂组发现当ATM/ATR通路被抑制剂KU55933阻断后,上游基因P53、P21、p-chk1蛋白表达降低,下游基因CDC25A、CDC25C、Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而p-chk2、WEEL蛋白的表达在两组间无明显差异(P>0.05)。空白组、对照组、过表达组中p-chk1蛋白表达在放疗后显著高于放疗前(P<0.05),而三组中P53、p-chk2蛋白表达在放疗前后无明显差异(P>0.05)。结论:Bmal1基因能够上调P53、P21的表达而抑制肿瘤细胞的增殖,放疗可通过激活ATM/ATR通路使Bmal1基因过表达从而上调ATM/ATR通路上游基因P53、P21、p-chk1、p-chk2的表达,同时使CDC25A、CDC25C磷酸化失活而抑制下游Cyclin-CDK复合物活性,达到阻滞细胞周期的作用。