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本文应用核糖体基因间隔区IGS1克隆序列、看家基因和基因间隔区序列以及单链构象多态性(SSCP)、GeneScan和脉冲电泳核型分析方法,对酿酒酵母做了种群分析和菌株分型研究。另外,在收集自然酿酒酵母的同时,也对相关生境的其它酵母菌资源做了调查。主要研究结果如下:
1)改进了Sniegowski等发表的富集方法,确立了从树皮和土壤等样品富集酿酒酵母的方法;证实了ITS1部分序列的SSCP分析鉴定酿酒酵母的有效性;共分离自然酿酒酵母菌株44株。
2)在种群水平上揭示了酿酒酵母核糖体基因间隔区IGS1的变异特征,证实这一多拷贝序列在基因组内存在序列多态性,发现适合酿酒酵母菌株分型的一个IGS1小片断。
3)虽然单个看家基因的分辨率低于相同染色体上对应的基因间隔区,但是4个看家基因串联序列显示了比4个间隔区串联序列更高的分辨率,而且看家基因序列便于扩增、测序和分析,因此初步认为看家基因更适于酿酒酵母种群分析,并且本文所用的看家基因就是很好的DNA位点。
4)4个看家基因和4个基因间隔区串联序列分析及IGS1克隆序列分析,都支持国内酿酒酵母存在独特的树皮和腐木来源种群。
5)在分离酿酒酵母的同时,从新疆、陕西、云南和海南等地分离其它酵母菌1000多株,目前鉴定到种的菌株共187株,属于49种、19属,其中云南的种属类别最多;发现疑似新种10余个,已发表Saccharomyces新种1个,Candida新种4个。
本论文为国内酿酒酵母种群研究奠定了材料和方法基础,为工业生产菌株的质量控制和知识产权保护提供了技术参考,也为国内酵母菌物种多样性研究积累了资料。