背景据统计，肺癌在我国恶性肿瘤的死因中占首位，严重影响着国人的生命健康。其中，非小细胞肺癌据是肺癌中最为常见的类型，约占其80%~85%。由于缺乏早期有效的检查手段和筛选，致使我国80%的肺癌病人在发现和确诊时已属晚期，错失了最佳的治疗时间和治疗手段。手术是癌症患者的首选；对已不具备手术指征的患者而言，放、化疗亦是非常重要的治疗方法。但近年来，由于手术的不彻底性，化疗的多重耐药和放疗的低敏感性，使得临床治疗效果均不佳。在人们的积极探索下，肿瘤生物治疗应运而生，成为肿瘤综合疗法的第四种治疗模式。其中，细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer，CIK）是肿瘤过继免疫疗法的主要效应细胞，成为研究的热点。CIK细胞通过调动及增强患者的免疫功能，从而达到杀灭肿瘤细胞并防止其转移复发的目的，改善了肿瘤患者的预后，使患者的生存质量得到很大程度的提高。另外，近年来针对细胞受体和调控分子、关键基因为靶点的靶向治疗也得到了很好的研究和发展。在肺癌中，人们研究最多的是EGFR（表皮生长因子受体）基因，由此针对该基因研究产生的EGFR-TKI（表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂），如厄洛替尼、吉非替尼等，在临床上取得了相当好的成效。现阶段，肿瘤的治疗强调一个有效的综合治疗模式。本实验通过CIK细胞和国产的EGFR-TKI（Icotinib）联合作用，在体外对肺腺癌细胞系的杀伤实验，研究两种方法的可行性及有效率，为临床上肺癌的综合治疗提供指导意义。目的研究并观察CIK细胞疗法和不同浓度下的盐酸埃克替尼（Icotinib）对肺腺癌细胞系： PC9细胞（表皮生长因子受体突变型的细胞）和A549细胞（表皮生长因子受体野生型的细胞）的体外细胞毒效应。方法以体外培养的PC9细胞及A549细胞分别为靶细胞，将实验分为四组：CIK细胞单独组、3种不同浓度的盐酸埃克替尼单药组、CIK细胞+不同浓度下的埃克替尼联合组和空白对照组（即单独的靶细胞组）。（1）CCK8试剂盒检测CIK细胞和埃克替尼分别及联合应用对PC9细胞和A549细胞的体外生长抑制作用；（2）Annexin V-FITC试剂盒利用流式细胞仪检测CIK细胞和埃克替尼对两种靶细胞凋亡作用的影响；（3）用MTT法检测盐酸埃克替尼分别对两种靶细胞的IC50值。结果1CIK细胞对两种靶细胞杀伤作用的比较CCK8法及流式检测法对PC9细胞及A549细胞的杀伤率及凋亡率相当，CIK对两种靶细胞之间的细胞毒效应无显著差别(P＞0.05)，说明CIK细胞对肺癌细胞的杀伤具有有效性。2CIK细胞联合Icotinib组与各单独组的比较CCK8杀伤和Annexin V-FITC凋亡实验可观察：CIK细胞+埃克替尼联合组对靶细胞的体外杀伤作用均明显高于各单独治疗组，差异有统计学意义(P<0.01)）。3PC9细胞和A549细胞之间的比较从实验数据统计分析：联合组和埃克替尼单独组对PC9细胞的杀伤率及凋亡率均高于A549组，联合组对PC9细胞的杀伤率可达65.85±1.44%，A549细胞的联合杀伤率达52.92±1.57%，差异有统计学意义(P<0.05)）；4两种细胞的IC50值比较盐酸埃克替尼对PC9及A549细胞作用48h后的半数抑制浓度（IC50）分别为：0.21±0.03μmol/L、4.79±0.74μmol/L，差异有统计学意义(P<0.01)，说明EGFR-TKI的靶向药物对EGFR基因突变的肿瘤细胞效果更优。结论各组经过相应的处理得出的数据变化可以看出：CIK细胞对肺癌细胞表现出一定的杀灭作用，CIK细胞免疫疗法可适用于临床上肺癌的治疗。CIK细胞联合国产的EGFR基因靶向药物在体外可明显抑制肺癌细胞的生长，其联合作用的效应比单独疗法更佳，为临床上提供除肿瘤的传统疗法以外新的可行性和选择。细胞免疫疗法与分子靶向药物的结合，提高了治疗的效果，改善了患者的生存质量，降低了放化疗的毒副反应，将是未来肿瘤综合治疗的新趋势。