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半导体纳米粒子(Semiconductor nanoparticles,NPs)也称量子点(Quantum dots, QDs)是近年发展起来的一种新型荧光探针,与传统的有机荧光染料相比,具有许多优良的光谱性能:吸收光谱宽,发射光谱窄而对称,斯托克斯位移较大,通过调节量子点的组成和粒径大小可以使其发射不同颜色的光。近年来,半导体纳米粒子在生物化学、细胞生物学、分子生物学等研究领域显示了极其广阔的应用前景,已经引起了人们越来越广泛的重视。本论文以纳米粒子的制备、纳米粒子的性能表征、纳米粒子在生物标记以及免疫分析中的应用为主线,主要开展了以下几个方面的工作: 一、CdTe纳米粒子及CdTe标记免疫分析试剂的制备 以巯基乙酸(HS-CH2-COOH)为稳定剂,在水相中直接合成水溶性良好的CdTe纳米粒子。吸收光谱和荧光光谱表明,所合成的CdTe纳米粒子具有优异的发光特性。随着回流时间的增加,纳米粒子的粒径变大,其荧光发射峰和紫外吸收峰发生红移,半峰宽逐渐变宽,荧光颜色从绿色逐渐向红色过渡。以制备的CdTe半导体纳米粒子标记BSA和双酚A抗体,建立了以量子点作为标记物的荧光免疫分析测定双酚A的新方法。 二、以CdTe标记抗体为试剂原子吸收-免疫分析法测定雌二醇 利用水热法合成的CdTe半导体纳米粒子标记雌二醇抗体制备了一种新型的标记免疫分析试剂。以该标记试剂为探针,结合高灵敏度的石墨炉原子吸收方法,建立了原子吸收-免疫分析测定雌二醇的新方法。测定雌二醇的线性范围为0.001~100μg/mL,检出限为0.38ng/mL。并用该方法对血清中雌二醇进行了测定,加标回收率在87％~108.2%之间,方法灵敏度高,准确度和精确度良好。 三、量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析法测定雌三醇 以量子点标记链霉亲和素为荧光探针,结合生物素-亲和素放大系统,采用竞争免疫分析模式,建立了一种灵敏度高、选择性好的检测雌三醇的荧光免疫分析方法。对几种测量参数如温育时间、温度、缓冲溶液pH值、试剂浓度等进行了优化;方法的线性范围为0.01~1000ng/mL,检出限0.0029ng/mL,血清样品加标回收率在91.97%~116.6%之间,效果良好。 四、量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析法测定己烯雌酚 以量子点标记链霉亲和素为荧光探针,结合生物素-亲和素放大系统,采用竞争免疫分析模式,建立了一种灵敏度高、选择性好的检测己烯雌酚的荧光免疫分析方法。对几种测量参数如包被抗原及抗体浓度、缓冲溶液pH值、温育时间及温度等进行了优化;方法的线性范围为0.01~2000ng/mL,检出限0.0045ng/mL,方法回收率在81.0%~119.8%之间,相对标准偏差为3.3%~8.7%,效果良好。