【摘 要】
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加州鲈(Micropterus salmoides)是我国淡水养殖的重要品种,具有抗病力强、生长迅速等优点。但是,随着加州鲈集约化养殖程度的提高和水环境的恶化,致病性微生物对加州鲈造成的危害也日趋严重,严重制约了加州鲈养殖业的可持续发展。2020年期间,江苏省南京市江宁区某加州鲈养殖场疾病爆发,发病加州鲈表现为胸鳍和上下颌充血,内脏糜烂,反应迟钝,严重时可导致死亡。本研究从患病加州鲈个体分离得到病
【基金项目】
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江苏省农业产业技术体系(JATS 2019-463); 江苏省农业科技创新基金(CX(18)2012、CX(19)2033);
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加州鲈(Micropterus salmoides)是我国淡水养殖的重要品种,具有抗病力强、生长迅速等优点。但是,随着加州鲈集约化养殖程度的提高和水环境的恶化,致病性微生物对加州鲈造成的危害也日趋严重,严重制约了加州鲈养殖业的可持续发展。2020年期间,江苏省南京市江宁区某加州鲈养殖场疾病爆发,发病加州鲈表现为胸鳍和上下颌充血,内脏糜烂,反应迟钝,严重时可导致死亡。本研究从患病加州鲈个体分离得到病原菌NJS1,探究了病原菌的致病性及其引起的宿主免疫反应,研究了芽孢杆菌CPA1-1对病原菌NJS1的拮抗效果,并分析了芽孢杆菌CPA1-1对加州鲈免疫的影响,研究结果为该疾病的防治建立理论基础。1.从患病加州鲈内脏中分离出优势菌株,通过形态学特征、生理生化特征以及16SrRNA序列分析鉴定分离菌,通过人工感染实验、组织病理学观察及毒力基因检测确定分离菌的致病性,并对分离菌进行了耐药性分析。结果表明,患病加州鲈内脏中分离得到的优势菌株NJS1为类志贺邻单胞菌,该菌株对加州鲈半数致死量(LD50)为2.9×105 CFU/mL;加州鲈感染类志贺邻单胞菌后,肝脏、肾脏和鳃组织出现严重的损伤,肝细胞间的连接被破坏,肝脏出现出血现象,大量炎症细胞浸润肾脏,肾小球坏死,鳃组织呼吸上皮细胞坏死;分离菌携带细胞溶解性肠毒素(ast)、细胞毒性肠毒素(act)和热敏感丝氨酸蛋白酶(aphA)等毒力基因;在37种抗菌药物中,分离菌对氨苄西林、氧氟沙星、氯霉素等22种药物敏感,对青霉素G、哌拉西林等8种药物耐受。2.采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了加州鲈感染类志贺邻单胞菌后6个免疫相关基因在肝脏、脾脏和肾脏中的表达,结果表明,感染类志贺邻单胞菌加州鲈免疫相关基因Hep1、HIF、IgM、IL15、Cas3和TGF的表达水平均出现不同程度上的上调,表明这些指标可作为监测加州鲈的健康指标,本研究结果可以为揭示加州鲈应答类志贺邻单胞菌的免疫机制提供参考。3.为探究贝莱斯芽孢杆菌CPA1-1对加州鲈的益生效果,本研究采用双层平板法测定贝莱斯芽孢杆菌对类志贺邻单胞菌的拮抗效果,并测定了贝莱斯芽孢杆菌发酵液对类志贺邻单胞菌的最小抑菌浓度。结果表明,贝莱斯芽孢杆菌对病原类志贺邻单胞菌有较好的抑菌效果,最小抑菌浓度为2.7×105 CFU/mL,抑菌圈的平均直径为20±1.3 mm。为进一步分析贝莱斯芽孢杆菌CPA1-1对加州鲈免疫的影响,在加州鲈养殖水体中添加不同浓度的贝莱斯芽孢杆菌发酵液,检测不同时间点加州鲈免疫相关酶的活性和基因的表达水平,采用浓度为2.9×105CFU/mL的类志贺邻单胞菌进行攻毒实验,比较加州鲈死亡情况,并通过水体中氨氮和亚硝酸氮含量测定,分析贝莱斯芽孢杆菌对水质的调控作用。结果表明,贝莱斯芽孢杆菌能调节加州鲈免疫相关基因的表达水平和免疫相关酶活性,提高加州鲈感染类志贺邻单胞菌后的成活率,并有效降低养殖水体中氨氮和亚硝酸氮含量。本研究为加州鲈细菌性疾病的防治提供了新的思路。
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