艾灸预刺激对AD大鼠海马14-3-3蛋白及神经元细胞凋亡的影响

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目的通过观察艾灸预刺激对AD模型大鼠学习记忆能力和海马区14-3-3蛋白的表达以及神经元细胞凋亡率的影响,探讨艾灸预刺激改善AD模型大鼠学习记忆能力以及抗神经元细胞凋亡作用的机制。深入探究艾灸在“治未病”理论指导下对AD防治作用的机理,并为艾灸在临床AD防治工作中的应用提供理论支撑。方法将SD大鼠70只通过Y型迷宫筛选后(即淘汰反应过于敏捷和过于迟钝的大鼠)随机分为正常组、假手术组、模型组、模灸组(即先造模后灸治)和艾灸预刺激组(以下简称预灸组)。选取百会和双侧肾俞穴施艾条温和灸。预灸组施行艾灸8疗程后造模,造模采取海马CA1区一次性注射寡聚Aβ1-42的方法。造模成功后(施行手术后第4天起)继续艾灸治疗11天,模灸组仅在造模成功后与预灸组同时进行灸治11天。造模成功后第14天开始进行Morris水迷宫空间探索和定位导航实验,共历时5天,实验完毕后取材。免疫印迹法检测大鼠海马14-3-3蛋白含量,流式细胞仪检测大鼠海马神经元细胞凋亡率。统计分析各组差异。结果1.Morris水迷宫实验:正常组与假手术组大鼠各项指标均无明显差异(p>0.05)。定位导航实验和空间探索实验均显示,模型组与假手术组比较,结果有极显著差异(p<0.01);与模型组比较,预灸组、模灸组结果优于模型组(p<0.01)且预灸组较模灸组更佳(p<0.05)。2.14-3-3蛋白免疫印迹结果表明:模型组大鼠海马内14-3-3蛋白水平明显升高(p<0.01),而不论艾灸治疗还是提前实施艾灸预防都可促进14-3-3蛋白的表达(p<0.05),艾灸预刺激与仅艾灸治疗比表达量更高(p<0.05)。流式细胞仪检测海马神经元凋亡数提示,Ap注射造模后神经元凋亡率明显上升,通过艾灸可降低其凋亡率且预刺激效果更明显(p<0.05)。结论1.根据AD肾虚髓空、神机失用的病机特点,应以益肾填髓,健脑益智为治则,可选择百会和肾俞作为艾灸防治该病的主穴。2.艾灸预刺激和艾灸治疗均能有效改善AD模型大鼠学习记忆功能,减轻AD患者认知功能退化等症状,从而延缓衰老。其中采取艾灸预防措施对学习记忆功能的改善作用更加明显。3.艾灸预刺激和艾灸治疗均能明显降低Ap诱导的神经元细胞的凋亡,增加14-3-3蛋白的表达,发挥神经保护效应。两者相比,以艾灸预刺激效果更为显著。4.艾灸防治AD的作用机制可能是通过抑制Ap诱导的神经元细胞凋亡,增加14-3-3蛋白的表达发挥抗凋亡作用而实现的。
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