胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,据2000年资料统计,全球每年新发胃癌87.6万例,占所有新发癌症病例的9%,仅次于肺癌、乳腺癌和肠癌之后,位居第4位。每年约有64.7万人因胃癌死亡,位居癌症死因的第2位[1]。现阶段胃癌的治疗仍是以综合治疗为主,当然手术是主要治疗手段,由于许多胃癌发现就属于中晚期,失去了手术机会,化疗是提高治愈的主要手段,多药耐药(multidrugresistance,MDR)是化疗失败的主要因素,近年来国内外对其研究已经有了初步进展,寻找耐药逆转剂是另外一种方向,越来越多的研究表明由于DNA聚合酶β在许多恶性肿瘤中均有较高表达,同时也可以提高DNA修复能力。国内外专家研究了许多新的抗癌药物来防止耐药的发生,那么另外的方法则是寻找耐药逆转剂来逆转多药耐药。国内外学者对许多西药耐药逆转剂进行了许多研究,但是由于西药的逆转剂毒副作用大、作用靶点相对比较单一并且价格昂贵,在临床上的应用受到很大限制。中药逆转剂已经逐渐成为研究的热点,其主要优势为副作用低、作用靶点较多等。 　　目的：通过临床上的观察、导师高萍教授的临床经验以及现代药理学对藤梨根的认识,发现其具有抗癌作用,对胃癌、食管癌、结肠癌等肿瘤疗效较好,所以藤梨根体内体外研究受到了较多的关注。本实验以胃癌SGC7901/cDDP细胞系为研究对象,运用细胞培养,细胞形态学,MTT法等现代技术作为实验方法,同时应用医学统计学来分析实验结果,通过体外实验观察一定剂量的RAE能否降低耐药细胞株polβ基因的表达水平,以至于此剂量的RAE可以逆转胃癌化疗耐药的作用。进而为下一步临床以及科研提供科学依据,以期藤梨根可以成为中药逆转剂进而应用于临床。 　　方法：①将胃癌细胞株SGC7901置于含 DDP(0.5μg/mL)的 RPMI-1640 培养基中进行培养；用 MTT 法检测藤梨根提取物( RAE)无明显细胞毒剂量,并用无细胞毒性的剂量进行逆转耐药试验；用 MTT法分别检测 SGC7901/cDDP加入藤梨根提取物与不加藤梨根提取物分别进行体外培养 48h 后细胞的杀伤活性以及存活率,将加 RAE 与不加 RAE 所得两组数据进行线性回归的统计方法分别计算出各组的抑制一半时抑制剂的浓度也就是 IC50,计算逆转倍数=对照组IC50/实验组 IC50。②将耐药细胞株同时分为两组实验组和对照组,实验组选用藤梨根提取物干预,两组细胞都需要应用 RT-PCR 法检测 DNA 聚合酶β的表达水平。通过表达水平的高低变化来观察藤梨根提取物是不是可以逆转胃癌耐药细胞株的耐药③全部数据均用 SPSS13.0 统计软件包处理,数据以x ±S 表示,IC50的计算采用线性回归的统计方法,两组数据比较,应用 t检验。 　　结果：①RAE对人胃SGC7901/cDDP细胞存在细胞毒性作用,并且同RAE的浓度有关。5、10、15μg/mL组与对照组抑制率无统计学差异(P>0.05),选用RAE100μg/mL其抑制率为19.3%,RAE1mg/mL抑制率为31.0%,与对照组比较有显著意义(P<0.05)。所以根据统计学分析浓度为10μg/mLRAE抑制作用呈现浓度的依赖性即该浓度是最佳的逆转剂的实验浓度。②单独应用顺铂,顺铂对 SGC7901/cDDP细胞的 IC50 为 42.42μg/mL,顺铂与 10μg/ml 的非细胞毒性剂量 RAE 共同作用,其对SGC7901/cDDP的IC50降低为25.27 μg/mL,其逆转倍数为1.68。③分别应用 RT-PCR 法检测实验组以及对照组两组细胞 polβ的表达,对照组的 90%polβ基因呈高水平表达,只有 10%呈低水平表达；实验组中有 20%polβ基因呈高水平表达,其余80%呈低水平表达。应用统计学软件系统分析后显示polβ基因在两组表达程度上差异性显著,表明藤梨根提取物可以降低胃癌细胞株polβ基因的表达水平,从而逆转耐药。(P<0.05)。 　　结论：①RAE 对 SGC7901/cDDP 细胞存在细胞毒性作用,但是其细胞毒性作用表现为对 RAE 剂量的依赖性。②顺铂单独作用于 SGC7901/cDDP 的 IC50为 42.42μg/mL,顺铂与非细胞毒性剂 10μg/mL 的 RAE 共同作用, DDP 对SGC7901/cDDP的 IC50 降低 25.27μg/mL,是亲本细胞 SGC7901为 1.68 倍。表明一定浓度的 RAE 对人胃癌 SGC7901 细胞对顺铂的耐药可以起到部分逆转的作用。③RT-PCR法分别检测两组细胞 polβ的表达,对照组显示 polβ基因的表达明显增高,说明一定剂量的 RAE 能够降低 SGC7901/cDDPpolβ的基因表达水平,这一研究为藤梨根提取物抗肿瘤作用及其逆转耐药提供了实验方向,为进一步临床应用以及进一步深入的研究打下了基础。