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目的： 利用已纯化的HER2-ScFv，干预体外培养高表达HER2的T6-17肿瘤细胞，进而探讨HER2-ScFv通过PI3K/AKT，MAPK/ERK1/2信号通路对T6-17肿瘤细胞增殖抑制的机制。 方法： （1）体外培养高表达HER2的小鼠成纤维瘤T6-17细胞。 （2）根据加入到 T6-17肿瘤细胞培养液中干预药物的不同分四组，即HER2-ScFv治疗组、曲妥珠单抗治疗组、西妥昔单抗治疗组和PBS对照组。 （3）采用MTT法检测各干预组对HER2阳性肿瘤细胞T6-17增殖抑制作用。 （4）采用Western Blot的方法研究各组药物干预高表达HER2的肿瘤细胞系T6-17后，两条细胞信号通路PI3K/AKT，MAPK/ERK1/2中细胞信号转导蛋白AKT/P-AKT，MEK/P-MEK，ERK1/2/P-ERK1/2的表达情况。 结果： (1) HER2-ScFv干预组、曲妥珠单抗干预组、西妥昔单抗干预组和PBS对照组干预HER2阳性肿瘤细胞T6-17后，MTT实验检测结果显示四组之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）；HER2-ScFv组抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17增殖的抑制率为33.65％，与 PBS组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；曲妥珠单抗组抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17增殖的抑制率为34.13%，与PBS组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；而HER2-ScFv组与曲妥珠单抗组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；西妥昔单抗组抑制HER2阳性肿瘤细胞T6-17增殖的抑瘤率为2.39%，与 HER2-ScFv组及曲妥珠单抗治疗组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05），而与PBS组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。 （2）经不同浓度的HER2-ScFv干预后，采用Western bolt实验检测T6-17肿瘤细胞中两条信号通路中信号转导分子表达水平结果显示： 1）检测AKT/ P-AKT的表达水平：①随着HER2-ScFv干预浓度的增加，T6-17肿瘤细胞的P-AKT和AKT的表达逐渐降低，P-AKT的灰度值各药物浓度组与PBS组比较，从0.486逐渐降低到0.168，下降比例为63.5%。AKT的灰度值各药物浓度组与PBS组比较，从0.761逐渐降低到0.309，下降比例为59.5%， P-AKT灰度值下降比例比AKT更加明显。②当HER2-ScFv组干预浓度1mg/ml及大于1mg/ml各组时，P-AKT的表达与 PBS对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05），而浓度小于1mg/ml的两组与 PBS对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。③当HER2-ScFv干预浓度为0.5mg/ml及其以上各组时，AKT的表达与PBS对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05），而浓度为0.25mg/ml的一组与PBS对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。 2）检测 P-MEK/MEK的表达水平：①随着 HER2-ScFv干预浓度的增加， T6-17肿瘤细胞中P-MEK和MEK的表达逐渐降低，P-MEK的灰度值各药物干预组与PBS组比较，从0.850逐渐降低到0.122，下降比例为81.5%；MEK的灰度值各药物浓度组与PBS组比较，从0.887逐渐降低到0.438，下降比例为61.7%， P-MEK灰度值下降比例比MEK更加明显。②当HER2-ScFv干预浓度为0.5mg/ml及其以上各组，P-MEK的表达与PBS对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05），而浓度为0.25mg/ml的一组与PBS对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。③HER2-ScFv的六个干预组与PBS对照组相比，MEK的表达差异均有统计学意义（P＜0.05）。 3）检测P-ERK1/2/ERK1/2的表达水平：①随着HER2-ScFv浓度的增加， T6-17肿瘤细胞中P-ERK1/2和ERK1/2的表达也逐渐下降，P-ERK1/2的灰度值各干预药物浓度组与PBS组比较，从0.849逐渐降低到0.156，下降比例为85.6%。ERK1/2的灰度值各药物浓度组与PBS组比较，从0.820逐渐降低到0.314，下降比例为50.6%，P-ERK1/2灰度值下降比例显现出比ERK1/2更加明显的趋势。②P-ERK1/2的表达与内参的比值，HER2-ScFv的不同浓度干预组与PBS对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）。③随着HER2-ScFv干预浓度的增加，ERK1/2的表达量也逐渐降低。HER2-ScFv干预浓度为1mg/ml及其以上各组与PBS对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。而浓度小于1mg/ml的两组与PBS对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。 （3）经相同摩尔浓度的HER2-ScFv、曲妥珠单抗、西妥昔单抗和PBS干预后，采用Western bolt实验检测T6-17肿瘤细胞中两条信号通路中信号转导分子表达水平结果显示： 1）检测P-AKT/AKT的表达水平：①四组之间P-AKT和AKT的表达量相比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。② HER2-ScFv干预组和曲妥珠单抗组的P-AKT/AKT的表达量与西妥昔单抗组和PBS组的表达相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。③HER2-ScFv组和曲妥珠单抗组的P-AKT/AKT表达，差异无统计学意义（P＞0.05），西妥昔单抗组P-AKT/AKT的表达与PBS组相比，差异也无统计学意义（P＞0.05）。 2）检测P-MEK/MEK的表达水平也显现出与P-AKT/AKT的表达相似的结果。①HER2-ScFv干预组和曲妥珠单抗组P-MEK/MEK的表达与西妥昔单抗组和PBS组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。②HER2-ScFv干预组与曲妥珠单抗组相比，西妥昔单抗组和PBS组相比，T6-17肿瘤细胞的P-MEK/MEK的表达，差异均无统计学意义（P＞0.05）。 3）进一步检测P-ERK1/2/ERK1/2表达：①四组之间P-ERK1/2/和ERK1/2的表达量相比较差异有统计学意义（P＜0.05）。② HER2-ScFv治疗组和曲妥珠单抗组的P-ERK1/2和ERK1/2的表达与西妥昔单抗组和PBS组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）；而HER2-ScFv处理组与曲妥珠单抗组相比，西妥昔单抗组和PBS组相比，差异均无统计学意义（P＞0.05）。 结论： （1）HER2-ScFv体外可抑制高表达HER2的肿瘤细胞T6-17的增殖。 （2）HER2-ScFv是通过PI3K/AKT信号通路抑制HER2阳性细胞T6-17增殖。 （3）HER2-ScFv也可以通过另一MAPK/ERK1/2信号通路抑制HER2阳性细胞T6-17增殖。