【摘 要】
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对自筛选的产胆固醇氧化酶的短杆菌DGC-007进行UV、NTG、UV+LiCl以及DES诱变,获得一稳定酶分泌型突变株DGC-2,该突变株100%分泌胞外胆固醇氧化酶.对该菌株产酶条件进行优化,
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对自筛选的产胆固醇氧化酶的短杆菌DGC-007进行UV、NTG、UV+LiCl以及DES诱变,获得一稳定酶分泌型突变株DGC<,D>-2,该突变株100%分泌胞外胆固醇氧化酶.对该菌株产酶条件进行优化,确定了DGC<,D>-2合适的产酶培养基及其组成并确定了在发酵后期控制pH与补加糖的工艺条件.在发酵温度为30℃,培养基起始pH7.5,发酵48h,菌株产酶可达380U/L,同时可获得氧化产物胆甾-4-烯-3-酮浓度为63mg/100ml.在此基础上,在2升台式发酵罐上对遥瓶条件验证,发酵结果接近遥瓶结果.用离子交换初步分离发酵液中的酶,得两个酶组分,两组分催化特性一致.由于发酵液仅含有胆固醇氧化支路酶系中的胆固醇氧化酶,因此用发酵液进行了初步应用试验,以发酵液替代进口商品胆固醇氧化酶进行医学检测,准确度达96%以上.
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