【摘 要】
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端粒酶在85%以上的恶性肿瘤组织中阳性表达,而在正常体细胞则一般为阴性。把端粒酶作为肿瘤治疗的靶点具有良好的应用前景。目前研究认为端粒酶复合体主要由人端粒酶RNA(hTR)
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端粒酶在85%以上的恶性肿瘤组织中阳性表达,而在正常体细胞则一般为阴性。把端粒酶作为肿瘤治疗的靶点具有良好的应用前景。目前研究认为端粒酶复合体主要由人端粒酶RNA(hTR)和人端粒酶反转录酶(hTERT)组成,其余的蛋白和它们相连,并促进其折叠和装配。端粒DNA的合成必须以hTR为模板,通过反转录合成。最近研究报道hTERT既是影响端粒酶活性的最重要部分,也是端粒酶活性的限速因子,它在80%—90%的肿瘤细胞中表达。因此,靶向hTERT显然更为理想。其中重要的方法有反义核苷酸技术封闭、锤头状核酶切割和抑制hTERT的转录等。 siRNA是用于阻断特定基因表达的有效手段,我们将构建靶向hTERT的siRNA的表达载体,并检测这种siRNA抑制Hela细胞端粒酶活性的能力。 首先,我们构建抑制端粒酶活性的siRNA瞬时转染载体pSUP—hTE。方法是化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向端粒酶hTERT基因的寡核苷酸(各64个碱基),经退火后克隆到用Bgl Ⅱ、HindⅢ双酶切和CIP处理后的pSUPER载体的polⅢ H1启动子的下游。重组构建的pSUP-hTE载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析,结果
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