【摘 要】
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通过观察细胞周期和凋亡相关因子pRb和E2F-1的变化,探讨褪黑素(melatonin,MLT)阻滞H22肝癌细胞周期、诱导细胞凋亡的机制,为临床应用褪黑素预防和治疗人类肿瘤提供理论依据.
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通过观察细胞周期和凋亡相关因子pRb和E2F-1的变化,探讨褪黑素(melatonin,MLT)阻滞H22肝癌细胞周期、诱导细胞凋亡的机制,为临床应用褪黑素预防和治疗人类肿瘤提供理论依据.在体外,H22细胞用含10％小牛血清RPMI 1640培养基培养,并用1×10<-9>mol/LT和1×10<-6>mol/LMLT孵育,以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分析细胞活力,吖啶橙(acridine orange,AO)荧光染色观察细胞的形态学变化,碘化丙啶(PI)单染后,流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析细胞周期时相分布及凋亡细胞比例,免疫组化SABC法检测H22细胞pRb和E2F-1蛋白水平.动物实验中,用H22细胞建立荷瘤动物模型,观察两种不同浓度(4mg/kg.d和0.04mg/kg.d)MLT对荷瘤动物的治疗效果;免疫组化SABC法检测MLT治疗后移植瘤组织pRb和E2F-1蛋白水平.结果显示用14mg/kg.d剂量MLT治疗荷瘤动物,动物一般状况得到明显改善,荷瘤15天的死亡率降低;免疫组化检测也显示MLT处理组pRb水平降低,E2F-1水平增高.因此,我们认为药理浓度的MLT是通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡来抑制H22细胞的增殖,而生理浓度的MLT主要通过阻滞细胞周期来发挥作用;阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡与MLT上调E2F-1水平,下调pRb水平有关.
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