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目的:1、构建RNF20-shRNA慢病毒载体,靶向感染人外周血急性T淋巴细胞白血病细胞(jurkat细胞),敲低细胞内环指蛋白20(ringfingerprotein20,RNF20)表达,筛选出稳定高表达RNF20-shRNA的细胞株。2、探究RNF20对人外周血急性T淋巴细胞白血病细胞基因断裂修复与增殖能力、免疫功能的影响。方法:1、在BankGene搜索RNF20基因序列,设计三条目的基因靶点干扰序列,连接至pLent-U6-GFP-Puro线性载体,转化DH5α感受态细胞,经含有相关抗生素Luria-Bertani固体培养基(Luria-Bertani,LB)筛选,挑取适宜菌落经PCR鉴定转化子及阳性克隆测序。2、利用293T-FT细胞对慢病毒载体进行包装,Q-PCR检验靶蛋白抑制效率,择取抑制效率最佳慢病毒载体进行大量包装扩增。3、pLent-U6-GFP-Puro-shRNF20慢病毒感染并筛选稳定表达干扰基因的T细胞。4、X-ray辐照诱导基因断裂损伤,探究RNF20蛋白低表达的T细胞基因修复与增殖能力。5、通过转录组测序检验shRNF20/Ctrl-jurkat细胞免疫功能相关基因表达水平。结果:1、成功构建RNF20-shRNA慢病毒载体,筛选获得目的基因高表达的jurkat细胞。2、shRNF20-jurkat细胞比shCtrl jurkat细胞增殖速度快,RNF20的表达维护基因修复能力。3、shRNF20-jurkat细胞IL-2、γ-IFN、EOMES、TBX21、FASLG表达水平均高于shCtrl-jurkat细胞,RNF20蛋白抑制T细胞正常免疫功能。结论:E3泛素化连接酶RNF20参与T细胞基因损伤修复、细胞增殖与免疫过程,其低表达阻碍基因断裂修复,加快细胞增殖速度,促进免疫功能,皆与肿瘤患者癌细胞生物学特点相吻合。由此证明,RNF20可作为肿瘤防治研究一切入点。