为了研究乳腺上皮细胞通过TLR2或TLR4介导的天然免疫功能，本试验采用改良型混合酶消化法和两步酶消化法比较了体外培养小鼠乳腺上皮细胞状况，采用角蛋白18激光共聚焦显微技术鉴定目的细胞；用10μg/mL LPS刺激细胞，采用ELISA法检测细胞上清液中IL-8和TNF-α的含量变化；采用免疫荧光法鉴定乳腺上皮细胞上TLR2和TLR4的存在；通过添加TLR2和TLR4受体拮抗剂，再采用ELISA法检测细胞上清液中IL-8和TNF-α的含量变化。结果表明：混合酶消化法能在短期内分离到大量的乳腺上皮细胞，且细胞纯度达到98%，细胞能连续培养至第4代；而两步酶消化法虽能分离到一定量的乳腺细胞，但细胞继代培养困难，且细胞不易纯化；小鼠乳腺上皮细胞在LPS刺激下，能极显著地分泌IL-8和TNF-α细胞因子（P＜0.01）；细胞膜上存在TLR2和TLR4受体蛋白的表达；添加TLR4受体拮抗剂后小鼠乳腺上皮细胞在LPS刺激下分泌的细胞因子IL-8和TNF-α的含量极显著的下降（P＜0.01），而添加TLR2受体拮抗剂后小鼠乳腺上皮细胞在LPS刺激下分泌的细胞因子IL-8和TNF-α的含量没有明显的变化（P＞0.05）。结果提示：混合酶消化法培养小鼠乳腺上皮细胞优于两步酶消化法，小鼠乳腺上皮细胞在LPS刺激下因分泌细胞因子IL-8和TNF-α而具有天然免疫能力，细胞膜上存在TLR2和TLR4受体蛋白的表达，在LPS刺激下之所以能发挥天然免疫功能，主要是通过TLR4对LPS信号进行转导，最后导致细胞因子IL-8和TNF-α的分泌。这些结果将为乳腺上皮细胞的功能及中药对细胞的影响研究奠定良好的基础。