【摘 要】
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超嗜热菌（Aquifex aeolicus）亮氨酰-tRNA合成酶,αβ-LeuRS,是已知唯一的杂合二体亮氨酰-tRNA合成酶。它包含α和β两个亚基,分子量分别是74.0KDa和33.5 KDa。编码α亚基的基因
【出 处】
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中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）
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超嗜热菌（Aquifex aeolicus）亮氨酰-tRNA合成酶,αβ-LeuRS,是已知唯一的杂合二体亮氨酰-tRNA合成酶。它包含α和β两个亚基,分子量分别是74.0KDa和33.5 KDa。编码α亚基的基因被克隆进入pSBET-b载体,并在其序列前添加编码6个组氨酸的寡核苷酸片段。pSBET-b载体含有编码稀有的大肠杆菌（Escherichia coli） tRNAArg （AGA/AGG）的argU基因,该基因有助于含有高频率AGA/AGG密码子的αβ-LeuRS在E. coli中大量表达。编码β亚基的基因被克隆进入pET-15b载体。两个重组质粒被共转化进入E. coli BL21-CodonPlus （DE3）菌株,进而表达基因产生αβ-LeuRS。该酶的α亚基N-端带有6个组氨酸,利用Ni-NTA亲和层析纯化,从250毫升培养基中得到7毫克纯化的αβ-LeuRS。N-端的组氨酸对酶的氨基酰化活力没有影响。人胞质亮氨酰-tRNA合成酶（hcLeuRS）是一个多合成酶复合物（aaRS复合物）的组成成分,这与以游离形式存在的原核和低等真核生物的亮氨酰-tRNA合成酶（LeuRS）有显著不同。在本实验室已经纯化了hcLeuRS的基础上,本
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