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第一部分 HOTAIR和PRB在子宫内膜癌中的表达相关性研究
目的：探究HOTAIR 和PRB在子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞株中的表达相关性；检测下调HOTAIR对子宫内膜癌细胞PRB表达水平的影响。
方法：运用定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）分析20例正常子宫内膜及20例子宫内膜癌组织、四种不同孕激素敏感性子宫内膜癌细胞株（AN3CA、HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa）中HOTAIR和PRB的表达水平；构建HOTAIR靶向性短发夹RNA（shHOTAIR）转染Ishiwaka和HEC-1A细胞，采用遗传霉素（G418）筛选出稳定低表达HOTAIR细胞株，采用qRT-PCR及免疫印迹（western blotting）检测细胞中PRB mRNA和蛋白表达水平的变化。
结果：1. 与正常子宫内膜相比，HOTAIR在子宫内膜癌组织中呈高表达，PRB在子宫内膜癌组织中呈低表达，两者表达水平呈显著负相关（相关系数r =-0.7647，P＜0.001）；与对孕激素敏感的Ishikawa细胞相比，孕激素敏感性较低的HEC-1A、HEC-1B及ANSCA细胞中HOTAIR表达相对较高，PRB表达相对较低。四种细胞株中HOTAIR与PRB的表达水平亦呈显著负相关（相关系数r =-0.9609，P =0.0391）。2.与转染对照质粒组(shNC)相比，qRT-PCR及western blotting结果显示转染shHOAIR后，PRB mRNA及蛋白水平均提高。
结论：HOTAIR与PRB在子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞株中的表达水平呈负相关，下调HOTAIR能提高子宫内膜癌细胞中PRB的表达水平，提示HOTAIR可能影响子宫内膜癌孕激素治疗敏感性。
第二部分 下调HOTAIR增强子宫内膜癌对孕激素的敏感性
目的：探究下调HOTAIR引起的子宫内膜癌孕激素敏感性的变化。
方法：使用不同浓度的醋酸甲羟孕酮处理转染 shNC 及 shHOTAIR 的 Ishikawa 和HEC-1A细胞48小时，运用MTT法检测不同组别细胞活性并计算IC50；克隆形成实验检测细胞增殖能力；采用电镜检测细胞自噬水平；采用流式细胞术检测细胞凋亡能力；采用western blotting检测细胞凋亡及自噬相关标记物（BAX、Bcl-2、LC3及 P62）的表达水平；选用 6 周龄雌性 BALB/c 裸鼠，皮下种植子宫内膜癌细胞HEC-1A，构建裸鼠皮下移植瘤模型，肿瘤形成后每 3 天给予腹腔注射醋酸甲羟孕酮。给药 3 周后处死裸鼠，取下瘤体后测量瘤体大小及重量，并行 qRT-PCR 检测HOTAIR表达水平，免疫组织化学检测PRB、BAX及Bcl-2蛋白表达水平。
结果：1. 与shNC组相比，给予醋酸甲羟孕酮处理后，shHOTAIR组细胞活性下降， IC50明显降低，细胞增殖能力减弱，细胞自噬及凋亡水平提高。2. 与shNC组相比，给予醋酸甲羟孕酮处理后，shHOTAIR 组裸鼠移植瘤生长缓慢，瘤体重量缩减约70%，瘤体内HOTAIR表达降低，PRB和BAX蛋白表达增高，Bcl-2蛋白表达降低。
结论：下调HOTAIR可在体内外增强子宫内膜癌对孕激素的敏感性。
第三部分 PRB介导HOTAIR对子宫内膜癌孕激素敏感性的调控
目的：研究HOTAIR 通过调控PRB的表达引起子宫内膜癌细胞对孕激素敏感性的变化。
方法：构建 PRB 靶向性小干扰 RNA（siPRB），与 shHOTAIR 共转染 Ishiwaka 和HEC-1A，采用western blotting检测细胞中PRB蛋白水平的表达变化。采用MTT法、克隆形成实验、电镜及流式细胞术检测共转染shHOTAIR及siPRB后对Ishikawa、HEC-1A细胞孕激素敏感性的影响；采用western blotting检测共转染shHOTAIR及siPRB后Ishikawa、HEC-1A细胞凋亡及自噬相关标记物（BAX、Bcl-2、LC3及P62）的改变。
结果：在子宫内膜癌细胞中，下调 HOTAIR 可提高 PRB的表达水平并增强孕激素敏感性，在此基础上同时转染siPRB，PRB的表达水平和孕激素敏感性均有所恢复。
结论：HOTAIR可能通过PRB途径影响子宫内膜癌孕激素敏感性。
第四部分HOTAIR调控PRB的机制研究
目的：探讨HOTAIR对PRB的调控机制。
方法：采用western blotting检测转染shHOTAIR后，Ishikawa和HEC-1A细胞LSD1和H3K4me2的表达变化；使用LSD1抑制剂GSK2879552处理Ishikawa和HEC-1A细胞，western blotting检测PRB和H3K4me2的表达变化。采用流式细胞术及western blotting检测GSK2879552和MPA处理后的细胞凋亡水平。运用染色质免疫共沉淀技术检测转染shHOTAIR后Ishikawa、HEC-1A细胞PRB启动子区H3K4me2水平的变化。
结果：1. 下调shikawa和HEC-1A细胞HOTAIR的表达，LSD1表达水平无明显变化，H3K4me2表达水平升高；2. GSK2879552处理Ishikawa和HEC-1A细胞后，细胞内PRB和H3K4me2蛋白表达增强，流式细胞术及western blotting结果提示MPA处理细胞后的凋亡水平增强。3. ChIP法检测转染shHOTAIR后Ishikawa和HEC-1A细胞PRB启动子区H3K4me2水平升高。
结论：HOTAIR可通过招募LSD1结合至PRB启动子区，使H3K4me2的水平降低，从而抑制PRB基因转录水平。
目的：探究HOTAIR 和PRB在子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞株中的表达相关性；检测下调HOTAIR对子宫内膜癌细胞PRB表达水平的影响。
方法：运用定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）分析20例正常子宫内膜及20例子宫内膜癌组织、四种不同孕激素敏感性子宫内膜癌细胞株（AN3CA、HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa）中HOTAIR和PRB的表达水平；构建HOTAIR靶向性短发夹RNA（shHOTAIR）转染Ishiwaka和HEC-1A细胞，采用遗传霉素（G418）筛选出稳定低表达HOTAIR细胞株，采用qRT-PCR及免疫印迹（western blotting）检测细胞中PRB mRNA和蛋白表达水平的变化。
结果：1. 与正常子宫内膜相比，HOTAIR在子宫内膜癌组织中呈高表达，PRB在子宫内膜癌组织中呈低表达，两者表达水平呈显著负相关（相关系数r =-0.7647，P＜0.001）；与对孕激素敏感的Ishikawa细胞相比，孕激素敏感性较低的HEC-1A、HEC-1B及ANSCA细胞中HOTAIR表达相对较高，PRB表达相对较低。四种细胞株中HOTAIR与PRB的表达水平亦呈显著负相关（相关系数r =-0.9609，P =0.0391）。2.与转染对照质粒组(shNC)相比，qRT-PCR及western blotting结果显示转染shHOAIR后，PRB mRNA及蛋白水平均提高。
结论：HOTAIR与PRB在子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞株中的表达水平呈负相关，下调HOTAIR能提高子宫内膜癌细胞中PRB的表达水平，提示HOTAIR可能影响子宫内膜癌孕激素治疗敏感性。
第二部分 下调HOTAIR增强子宫内膜癌对孕激素的敏感性
目的：探究下调HOTAIR引起的子宫内膜癌孕激素敏感性的变化。
方法：使用不同浓度的醋酸甲羟孕酮处理转染 shNC 及 shHOTAIR 的 Ishikawa 和HEC-1A细胞48小时，运用MTT法检测不同组别细胞活性并计算IC50；克隆形成实验检测细胞增殖能力；采用电镜检测细胞自噬水平；采用流式细胞术检测细胞凋亡能力；采用western blotting检测细胞凋亡及自噬相关标记物（BAX、Bcl-2、LC3及 P62）的表达水平；选用 6 周龄雌性 BALB/c 裸鼠，皮下种植子宫内膜癌细胞HEC-1A，构建裸鼠皮下移植瘤模型，肿瘤形成后每 3 天给予腹腔注射醋酸甲羟孕酮。给药 3 周后处死裸鼠，取下瘤体后测量瘤体大小及重量，并行 qRT-PCR 检测HOTAIR表达水平，免疫组织化学检测PRB、BAX及Bcl-2蛋白表达水平。
结果：1. 与shNC组相比，给予醋酸甲羟孕酮处理后，shHOTAIR组细胞活性下降， IC50明显降低，细胞增殖能力减弱，细胞自噬及凋亡水平提高。2. 与shNC组相比，给予醋酸甲羟孕酮处理后，shHOTAIR 组裸鼠移植瘤生长缓慢，瘤体重量缩减约70%，瘤体内HOTAIR表达降低，PRB和BAX蛋白表达增高，Bcl-2蛋白表达降低。
结论：下调HOTAIR可在体内外增强子宫内膜癌对孕激素的敏感性。
第三部分 PRB介导HOTAIR对子宫内膜癌孕激素敏感性的调控
目的：研究HOTAIR 通过调控PRB的表达引起子宫内膜癌细胞对孕激素敏感性的变化。
方法：构建 PRB 靶向性小干扰 RNA（siPRB），与 shHOTAIR 共转染 Ishiwaka 和HEC-1A，采用western blotting检测细胞中PRB蛋白水平的表达变化。采用MTT法、克隆形成实验、电镜及流式细胞术检测共转染shHOTAIR及siPRB后对Ishikawa、HEC-1A细胞孕激素敏感性的影响；采用western blotting检测共转染shHOTAIR及siPRB后Ishikawa、HEC-1A细胞凋亡及自噬相关标记物（BAX、Bcl-2、LC3及P62）的改变。
结果：在子宫内膜癌细胞中，下调 HOTAIR 可提高 PRB的表达水平并增强孕激素敏感性，在此基础上同时转染siPRB，PRB的表达水平和孕激素敏感性均有所恢复。
结论：HOTAIR可能通过PRB途径影响子宫内膜癌孕激素敏感性。
第四部分HOTAIR调控PRB的机制研究
目的：探讨HOTAIR对PRB的调控机制。
方法：采用western blotting检测转染shHOTAIR后，Ishikawa和HEC-1A细胞LSD1和H3K4me2的表达变化；使用LSD1抑制剂GSK2879552处理Ishikawa和HEC-1A细胞，western blotting检测PRB和H3K4me2的表达变化。采用流式细胞术及western blotting检测GSK2879552和MPA处理后的细胞凋亡水平。运用染色质免疫共沉淀技术检测转染shHOTAIR后Ishikawa、HEC-1A细胞PRB启动子区H3K4me2水平的变化。
结果：1. 下调shikawa和HEC-1A细胞HOTAIR的表达，LSD1表达水平无明显变化，H3K4me2表达水平升高；2. GSK2879552处理Ishikawa和HEC-1A细胞后，细胞内PRB和H3K4me2蛋白表达增强，流式细胞术及western blotting结果提示MPA处理细胞后的凋亡水平增强。3. ChIP法检测转染shHOTAIR后Ishikawa和HEC-1A细胞PRB启动子区H3K4me2水平升高。
结论：HOTAIR可通过招募LSD1结合至PRB启动子区，使H3K4me2的水平降低，从而抑制PRB基因转录水平。