白介素-6、白藜芦醇对肺泡上皮细胞A549增殖的影响

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目的:研究白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白藜芦醇(resveratrol,Res)对肺泡上皮细胞A549增殖的影响,观察其对内毒素(endotoxin,LPS)诱导的A549细胞损伤中的干预作用。探讨白藜芦醇诱导A549细胞凋亡的机制,并构建A549细胞白介素-6 RNA干扰模型。方法:本实验通过A549细胞培养,按预设方案添加白介素-6、白藜芦醇、内毒素处理细胞样品;采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测A549细胞的增殖效应及不同药物对其增殖效应的影响;运用TUNEL染色检测白藜芦醇诱导的A549细胞凋亡;运用蛋白免疫印迹技术(Western blotting)检测A549细胞凋亡相关蛋白的表达变化;化学合成法合成白介素-6 SiRNA,通过脂质体转染干扰A549细胞白介素-6的表达;运用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测A549细胞内IL-6的表达及LPS刺激后的变化。结果:1.内毒素能损伤体外培养的A549细胞,其作用具有明显的时间、浓度依赖性;外源性白介素-6对内毒素诱导的A549细胞损伤的干预作用不明显。2.白藜芦醇对内毒素诱导的A549细胞损伤的干预作用不明显。白藜芦醇对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用,这种作用具有明显的时间、浓度依赖性。白藜芦醇对A549细胞的增殖抑制作用部分是通过诱导A549细胞凋亡而实现的。白藜芦醇诱导A549细胞凋亡可能是通过抑制Akt的表达及其磷酸化,从而调节线粒体凋亡途径相关蛋白的表达而实现的,其对死亡受体途径的相关蛋白影响不明显。3.体外培养的A549细胞存在白介素-6基因的表达,内毒素刺激A549细胞能导致其表达量的变化,通过脂质体转染的白介素-6 SiRNA能干扰A549细胞中白介素-6的表达。结论:外源性的白介素-6和白藜芦醇对内毒素诱导的A549细胞损伤的干预作用不明显;白藜芦醇对A549细胞存在明显的增殖抑制作用,能够通过调节凋亡相关蛋白的表达诱导A549细胞凋亡;体外培养的A549细胞能表达白介素-6,内毒素能诱导其表达量的变化,并成功构建了白介素-6 SiRNA。
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