丁酸梭菌保护肠上皮细胞缓解氧化应激的研究

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氧化应激在人和动物胃肠道中发生率高、隐蔽性强、危害性大,容易给人体健康造成威胁和给畜牧业的发展造成巨大损失。而丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是存在于人和动物肠道的严格厌氧的产芽孢益生菌,具有调节肠道微生态平衡、增强机体免疫功能、抗氧化和耐受性强等多种优良特性,拥有着良好的应用前景。本研究从健康仔猪肠道筛选分离出具有潜在益生效果的丁酸梭菌CB-M1。采用厌氧培养法进行菌种分离。将目标菌株进行形态学观察、生理生化鉴定和16S r DNA基因序列同源性分析,并构建了系统发育树。本研究选择金黄色葡萄球菌和屎肠球菌来对比分析丁酸梭菌CB-M1对肠上皮细胞Caco-2细胞系的保护作用。四种刺激剂乙二醛(Glyoxal,GO)、甲基乙二醛(Methylglyoxal,MGO)、4-羟基己烯醛(4-Hydroxyhexenal,HHE)和4-羟基壬烯醛(4?Hydroxynonenal,HNE)的使用浓度分别选择400μmol/L、400μmol/L、60μmol/L和60μmol/L;感染系数MOI=1:1(菌体数:细胞数)。存活率试验结果显示,在共培养的30 h内丁酸梭菌CB-M1对Caco-2细胞没有明显地促生长作用,金黄色葡萄球菌能显著地促进Caco-2细胞的生长(p<0.05),而屎肠球菌会极显著降低Caco-2细胞的存活率(p<0.01)。再结合ATRA抑制Nrf2-ARE通路的试验结果可发现,丁酸梭菌CB-M1不会诱导Caco-2细胞ROS水平明显的升高,而金黄色葡萄球菌和屎肠球菌会诱导Caco-2细胞的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平显著升高。丁酸梭菌CB-M1能明显的缓解GO、MGO、HHE和HNE对Caco-2细胞毒害作用和氧化应激的诱导作用,诱导Caco-2细胞表达IL-10来保护细胞的生长。金黄色葡萄球菌会加剧GO、MGO、HHE和HNE对Caco-2细胞的毒害作用和氧化应激的诱导作用,诱导Caco-2细胞表达IL-6,损伤细胞的生长。屎肠球菌在GO、MGO、HHE和HNE对Caco-2细胞的毒害作用和氧化应激的诱导作用中没有显示出明显的作用。综上所述,本研究从健康仔猪中成功分离鉴定出一株丁酸梭菌CB-M1,其不会诱导Caco-2细胞ROS水平升高以造成氧化应激,能诱导Caco-2细胞表达抗炎细胞因子IL-10,能明显缓解GO、MGO、HHE和HNE对Caco-2细胞氧化应激的诱导作用从而保护细胞。这为丁酸梭菌CB-M1后续微生态制剂化的应用奠定了一定的理论基础。
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