环保酵素对洱海微囊藻的降解作用及初步应用研究

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目的:1.分离纯化洱海主要优势微囊藻并研究其生长规律及特性。2.制做不同种类的环保酵素,筛查各自的溶藻能力,选取溶藻能力最强的苹果酵素进一步研究溶解作用,探讨其溶藻机制,最终研究环保酵素对洱海野生蓝藻的溶解效应,为环保酵素的大量应用提供理论基础。方法:1.采用水滴-涂布平板法分离纯化微囊藻,采用90%的丙酮提取叶绿素并用连续波长酶标仪测定其含量变化;采用显微镜计数藻细胞的个数,UV-T6紫外分光光度计测定其OD值表征其生长规律。2.在初始叶绿素a为0.457μg/mL的微囊藻藻液中加入10%(v/v)的环保酵素进行溶藻实验,筛查各种环保酵素的溶藻作用。3.在微囊藻藻液中加入不同体积(0~3mL)、不同稀释度(0~10-5倍)及经不同处理[原液、经0.22μm滤膜抽滤2次、高温灭菌(121℃、0.1MPa灭菌20min)、以12000r/min离心15min、0.25%的胰蛋白酶处理15min]的苹果酵素进行溶藻实验,测定叶绿素a的含量并计算清除率。4.采集洱海蓝藻爆发的水样按照不同剂量加入环保酵素进行溶藻实验,进一步确证其对野生蓝藻的溶解效率。结果:1.对分离鉴定的一株铜绿微囊藻研究表明:藻细胞密度与OD665呈线性关系(R2=0.9931),藻细胞的增长速率在第6天达到最大值为0.524,其叶绿素a及类胡萝卜素的含量随时间的变化而逐步升高。2.加入各种环保酵素后和对照组相比叶绿素a的含量均下降,尤其苹果酵素下降最明显,进一步研究表明:随着加入苹果酵素量的增加,叶绿素a的清除率先升高后下降,在加入0.6mL时除藻作用最强,第四天的清除率达到最大为94.475%;随稀释倍数的增加,叶绿素a的清除率先升高后下降,稀释10-1倍时的清除率最强,在第四天达最大为95.271%;经过不同处理的苹果酵素都能产生溶藻作用,第四天原液、经0.22μm滤膜抽滤2次、高温灭菌(121℃、0.1MPa灭菌20min)、以12000r/min离心15min、0.25%的胰蛋白酶处理15min的叶绿素a清除率分别为81.400%,84.358%,80.177%,79.524%和79.299%。3.在洱海野生蓝藻中加入不同剂量的环保酵素后,随着加入剂量的增加,除藻率先升高后下降,在加入2%(v/v)的环保酵素时能产生最强的溶藻效率。结论:1.此铜绿微囊藻的生长符合“S”型曲线,藻细胞密度与吸光度呈线性相关,其生长速率在第六天达到最大。2.制做出的几种环保酵素都有溶藻作用,尤以苹果酵素的溶藻作用最强,溶藻曲线较稳定,其溶藻机制为产生一种耐高温的非蛋白类物质间接作用溶藻,而且环保酵素能溶解多种藻类混合的野生蓝藻,其除藻率在加入2%(v/v)时达最大。
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