C5-siRNA对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

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目的:   本课题分为两部分,研究采用RNA技术,通过沉默C5补体激活产物的表达而抑制H/R心肌细胞补体的激活,进而探讨其对心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响。(1)研究C5-siRNA对乳鼠心肌细胞缺氧.复氧损伤的保护作用。(2)探讨C5-siRNA对乳鼠H/R损伤心肌细胞C5表达量的影响。   方法:   (1)将培养的原代单层心肌细胞随机分为4组:正常对照组(Control组)、缺氧复氧组(H/R组)、H/R+C5-siRNA组、H/R+空载体病毒组。其中后三组均经历2小时缺氧和4小时复氧,H/R+C5-siRNA组及H/R+空体病毒组在缺氧前2小时分别给予C5-siRNA及空载体病毒。用CCK-8快速比色法检测心肌细胞增殖情况(测OD值)。   (2)将培养的原代单层心肌细胞随机分为4组:正常对照组(Control组)、缺氧复氧组(H/R组)、H/R+C5-siRNA组、H/R+空载体病毒组。按方法(1)设计加入试剂后按上述条件培养。分别用RT-PCR法及WesternBlot法从RNA基因水平及蛋白水平测定C5表达量。   结果:   (1)H/R+C5-siRNA组测定OD值显著高于H/R组及 H/R+空载体病毒组(P<0.05)。   (2)用RT-PCR法及Western Blot法测定,H/R+C5-siRNA组C5表达量均显著低于H/R组及H/R+空载体病毒组。   结论:   (1)C5-siRNA对心肌细胞缺氧-复氧损伤具有保护作用。   (2)C5-siRNA能降低缺氧-复氧损伤心肌细胞 C5表达量,这可能与C5-siRNA对心肌缺氧-复氧损伤的保护作用有关。
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