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目的:初步调查本地区355例耐万古霉素肠球菌(VRE)感染高危人群的肠道内VRE的定植情况、耐药现状及耐药基因型分布状况,可为VRE临床感染预防、控制策略和治疗提供依据。方法:收集2018年1月至2019年1月本院符合纳入标准的住院患者(VRE感染高危人群)的粪便标本或肛拭子标本(仅适用于ICU患者)355例、健康对照者(在读大学生)的粪便标本40例,用自制肠球菌选择性培养基(PSE)进行菌种分离,哥伦比亚血琼脂培养基进行菌种纯化,用VITEK MS进行肠道分离株菌种鉴定;对已鉴定的肠球菌,用自制的含万古霉素6μg/ml、8μg/ml、32μg/ml的BHI琼脂培养基进行VRE初筛,获得VRE初筛(+)肠道分离株。收集2018年1月至2019年1月川北医学院附属医院检验科VRE临床分离株共9例。用E-test法(万古霉素E-test试条、替考拉宁E-test试条、M-H琼脂平板)测得VRE初筛(+)肠道分离株和VRE临床株的最低抑菌浓度(MIC)值,进行VRE确认,并确定其耐药表型。VRE的抗菌药物敏感性试验采用VITEK 2Compact(药敏卡AST-GP67)。用VITEK MS进行VRE各肠道分离株之间、VRE各临床株之间以及VRE各肠道分离株与临床株之间的同源性分析。采用PCR扩增-PCR产物琼脂糖凝胶电泳-成像检测VRE耐药基因Van A、Van B、Van C、Van D、Van E、Van G、Van L、Van M和Van N。用随机数字表单纯随机抽样4例菌株的PCR扩增阳性产物(肠道分离株及临床株各2例)送上海生工生物工程股份有限公司进行测序。所有数据采用SPSS23.0统计软件进行统计学分析。实验过程中菌株保存采用自制奶粉冻存管,置于-80℃超低温冰箱中保存。质控菌株:粪肠球菌ATCC29212(敏感)、粪肠球菌ATCC51299(耐药)。结果:1、肠道分离到的肠球菌中,VRE感染高危人群组355例,分离鉴定出肠球菌共474株,其中屎肠球菌291株(61.39%),粪肠球菌111株(23.41%),其他肠球菌72株(15.19%);健康对照组40例,分离鉴定出肠球菌共77株,其中屎肠球菌31株(40.26%),粪肠球菌25株(32.47%),其他肠球菌21株(27%)。2、对分离鉴定出的551株肠球菌(VRE感染高危人群组肠球菌474株+健康对照组肠球菌共77株),分别用含万古霉素6μg/ml、8μg/ml、32μg/ml的BHI琼脂培养基进行VRE初筛(+)及用万古霉素E-test试条进行确认VRE(+)。初筛结果显示对上述不同浓度的万古霉素耐药的肠球菌例数分别为:60例、22例、10例。最终用万古霉素E-test确认为VRE的有10例。32μg/ml的BHI琼脂培养基进行VRE初筛(+)及用万古霉素E-test试条进行确认VRE(+)菌株数一致。3、VRE感染高危人群组中,检出10例肠道VRE,其中来自神经外科6例,ICU1例,内分泌科2例,肿瘤科1例;所检出的肠道VRE全是屎肠球菌,未检出粪肠球菌及其他肠球菌。健康组未检出VRE。4、19株VRE(包括VRE肠道分离株10例和VRE临床株9例)的药敏结果显示,VRE对青霉素类、喹诺酮类、红霉素类、林可霉素类耐药率均为100%。VRE肠道分离株和VRE临床株对高浓度庆大霉素的耐药率分别为40%、33.3%;对高浓度庆大霉素的耐药率分别为40%、33.3%;对呋喃妥因的敏感率分别为50%、20%。而VRE对喹奴普汀/达福普汀、力奈唑胺、替加环素、高浓度链霉素的敏感性均为100%。5、19株VRE(包括VRE肠道分离株10例和VRE临床株9例)均同时检出Van A和VanM两种耐药基因型,检出率100%;仅4株VRE耐药表型和基因型相符,存在表型和基因型不一致的情况。未检测到Van B、Van C、Van D、Van E、Van G、Van L和Van N耐药基因型。6、同源性分析:各VRE肠道分离株相互之间的同源性为50%~60%;各VRE临床株相互之间的同源性为80%~95%;各VRE相互之间的同源性为75%~95%,其中大多数临床株VRE和肠道分离株VRE相互之间的同源性约为80~90%。7、耐药基因测序结果:结论:1、肠道分离到的肠球菌中,以屎肠球菌和粪肠球菌占绝大多数,其次为鸟肠球菌、小肠肠球菌、铅黄肠球菌和鹑鸡肠球菌,棉子糖肠球菌和耐久肠球菌少见。2、PSE琼脂培养基+万古霉素8μg/ml、32μg/ml的BHI琼脂培养基结合来筛查肠道VRE,具有经济、高效、对实验设备要求不高、可在基层开展、适用于大样本筛查等优势,可用于临床上对VRE定植/感染高危人群开展大规模肠道VRE筛查。3、19株VRE(包括VRE肠道分离株10例和VRE临床株9例)均为屎肠球菌,都属于多重耐药菌;VRE耐大部分抗菌药物,但对链阳菌素类(奎奴普丁/达福普丁)、噁唑烷酮类(利奈唑胺)、甘氨酰环类(替加环素)较敏感,故利奈唑胺、替加环素还可用于本地区大多数VRE感染临床治疗。4、19株VRE(包括VRE肠道分离株10例和VRE临床株9例)均同时检出Van A和Van M两种耐药基因型,耐药表型与基因型不完全一致。各VRE肠道分离株相互之间的的同源性较低(50%~60%);各VRE临床株相互之间有高度的同源性(80%~95%);肠道VRE和临床VRE之间具有高度同源性(大多数为80%~90%)。提示VRE入院筛查的重要性,对VRE筛查阳性者宜做好动态监测及相关消毒隔离工作。