论文部分内容阅读
本文对Ets-1在胰岛β--细胞凋亡中的作用和机制进行了研究。胰岛β-细胞需要大量的氧气进行线粒体呼吸，以合成足量ATP支持胰岛素分泌，因此对缺氧尤为敏感。胰岛在移植后早期处于严重缺氧的环境，这是造成胰岛β-细胞死亡和移植物原发性无功能的最主要的非免疫因素之一。细胞有其自身的抵御机制以适应缺氧环境，一些核心转录因子所介导的“细胞重编程”在其中起着至关重要的作用。以往的研究表明，缺氧会诱导转录因子Ets-1高表达，Ets-1继而以单独作用或者与缺氧诱导因子HIF协同作用的方式调控下游“缺氧基因”的表达，从而参与细胞的缺氧应激反应。Ets-1在胰岛β-细胞中的作用鲜有研究，我们偶然发现，缺氧也可以诱导β-细胞中的Ets-1基因快速表达，猜测它可能在β-细胞缺氧时起一定保护作用;因此，我们对缺氧时Ets-1在β-细胞中的表达、蛋白稳定性、转录激活活性和抗凋亡能力等进行了研究。 研究结果表明，转录因子Ets-1是对β-细胞缺氧性凋亡具有调节作用的一个立早基因。通过用qRT-PCR、Western Blot和荧光素酶报告基因实验对缺氧时Ets-1的转录、蛋白稳定性和转录激活活性进行检测，我们发现缺氧对Ets-1起多层次的调节作用，即中度缺氧促进Ets-1基因转录，严重缺氧则进一步增强Ets-1的转录激活活性和泛素-蛋白酶体所介导的Ets-1蛋白降解。对Ets-1蛋白进行缺失突变以后，我们发现只有失活型的Ets-1蛋白能抵抗严重缺氧所诱导的降解，说明此降解依赖于Ets-1转录激活活性的发挥。最后，我们在MIN6细胞和INS-1细胞中过表达外源性Ets-1，并用JC-1染色、FITC AnnexinⅤ/PI双染和流式细胞术检测细胞在缺氧时的线粒体膜电位和凋亡率变化，发现过表达Ets-1能以线粒体依赖性的方式抵抗缺氧诱导的细胞凋亡，确立了足量的Ets-1对抵抗缺氧性凋亡的关键作用。综上所述，我们将Ets-1定义为β-细胞中抵抗缺氧性凋亡的一个立早基因。由其转录依赖性降解所造成的活性相对不足是β-细胞对缺氧性损伤尤为敏感的重要原因。本研究提示，在β-细胞中实行可控性Ets-1过表达有望成为在移植后早期能成功保护胰岛移植物的一项新策略。