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目的: 通过不同低温处理肝细胞及肝癌细胞,观察细胞的超微结构变化,探讨温度对肝癌细胞生物学行为的影响。 方法: 将鼠源性肝癌细胞H22注入小鼠腹腔制作癌性腹水模型;经腹水分离提取癌细胞,分为常温组、-20℃、-40℃、-60℃组,模拟临床氩氦刀冷冻消融(不同温度)处理后对癌细胞进行透射电镜检查;并将不同温度冷处理的癌细胞分别植入小鼠体内、动态观察癌细胞的生存生长规律;模拟临床氩氦刀冷冻治疗过程,对活体犬的肝脏组织进行冷冻消融,采用彩色超声确定冷冻消融的“冰球”范围,切取不同低温处理的冰球处肝组织及冰球周围肝组织、采用HE染色及透射电镜方法观察其超微组织形态学变化。 结果: 1、冷处理-60℃组的癌细胞凋亡最明显,植入小鼠体内后仅有个别小鼠长出直径<10mm的肿块,大多数小鼠无肿块生长。结果提示低温的程度与肝癌细胞的活性呈正相关、与凋亡发生率呈负相关。 2、对氩氦刀冷冻消融后的肝组织通过光镜及电镜检查,提示低温在-60℃时肝细胞损伤的超微形态学变化最明显,提示为不可逆性损伤。 3、通过活体犬肝脏冷消融实验发现,术中应用彩超监测,-40℃与-60℃的“冰球”组织在影像学上并无差异,然而通过透射电镜观察,其细胞功能却有本质区别。实验结果提示:冷冻治疗肝癌的术后局部病灶复发与术中的影像学“冰球=组织灭活”的判断指标有一定相关性。 结论: 低温程度与组织细胞的生物学行为密切相关。局部组织经过-60℃的冷处理可发生不可逆性损伤。临床的氩氦刀治疗,通过影像学(CT、彩超)的“冰球覆盖范围”不能证明组织细胞的不可逆性损伤程度。