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目的研究5-脂氧合酶(5-LOX)通路调控了小胶质细胞M1/M2表型极化过程;黄芩苷(BC)、栀子苷(GP)及其7:3配伍(PW)抑制5-LOX通路调控小胶质细胞M1/M2表型极化转变机制以及黄芩苷、栀子苷及其7:3配伍对损伤神经元细胞是否有保护作用。方法(1)体外分别用LPS、IL-4建立了BV2小胶质细胞M1、M2分型模型,筛选出黄芩苷、栀子苷及其7:3配伍作用于BV2小胶质细胞的最适浓度。(2)通过炎性因子以及M1、M2标志物的表达情况分析给药后M1型小胶质细胞的极化情况。运用ELISA检测黄芩苷、栀子苷及其7:3配伍作用于小胶质细胞后的炎性因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;运用qPCR法检测给药前后小胶质细胞M1型标志物肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型标志物白细胞介素-10(IL-10)、甘露糖受体(CD206)的表达量。(3)探究给药前后5-LOX通路的变化以及探究是否抑制5-LOX通路有利于M1型小胶质细胞向M2极化。运用qPCR法检测给药前后小胶质细胞5-LOX mRNA的表达量,以及给予齐留通后小胶质细胞M1标志物TNF-α、iNOS和M2型标志物IL-10、CD206 mRNA的表达量。WB检测给药前后以及给予齐留通后5-LOX,半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1)、半胱氨酰白三烯受体2(CysLT2)以及白三烯B4受体1(BLT1)、白三烯B4受体2(BLT2)的蛋白表达量。(4)为了探究药物是通过直接作用于受损的神经细胞,还是通过M2型小胶质细胞来发挥神经保护作用。首先用条件培养箱以及CCK-8探索氧糖剥夺再灌注条件;用LPS作用于小胶质细胞的条件培养基(CM-LPS)、IL-4作用于小胶质细胞的条件培养基(CM-IL4)、PW作用于小胶质细胞的条件培养基(CM-PW)以及PW直接作用(PW)于氧糖剥夺再灌注后的SH-SY5Y,用流式细胞仪和WB检测其凋亡程度。结果(1)LPS(100ng/mL)、IL-4(20ng/mL)可以将BV2小胶质细胞极化为M1、M2两种不同的分型;且BC、GP、PW作用于小胶质细胞的最适浓度为125μM、62.5μM、31.25μM。(2)中低浓度的GP和各浓度的PW均可显著提高细胞IL-10的表达(P<0.01),中高浓度的BC可显著提高TGF-β1的表达(P<0.05),不同浓度的BC、PW均可显著降低细胞TNF-α的表达,qPCR显示BV2细胞经BC、GP、PW高低浓度预处理后,M1型标志物iNOS、TNF-α均较M1组有所降低,在PW组高剂量对CD206 mRNA表达有所增加。(3)蛋白质印迹可以看到在给予LPS刺激后的小胶质细胞BC、GP、PW后,5-LOX、BLT1和BLT2的蛋白表达较M1组均有所下降(P<0.05),且PW组效果最好;qPCR显示BV2小胶质细胞经齐留通和BC、GP、PW刺激培养后,5-LOX m RNA的表达被抑制,GP和PW的高低浓度可使M2标志物CD206、IL-10的mRNA表达量显著增加(P<0.05),小胶质细胞呈现M2型极化。而BV2细胞经BC、GP、PW高低浓度预处理后,M1型标志物iNOS m RNA表达量被抑制,BC、PW组低剂量可使TNF-αmRNA表达较M1组显著下降(P<0.05)。(4)从流式细胞术和蛋白质印迹可以看出,IL-4作用于小胶质细胞的条件培养基(CM-IL4)、PW直接作用(PW)和PW作用于小胶质细胞的条件培养基(CM-PW)均能减少SH-SY5Y神经细胞的凋亡比例,降低Bax和Caspase-3凋亡相关蛋白表达量,提高Bcl-2/Bax比值。结论黄芩苷、栀子苷及其7:3配伍能抑制5-LOX炎症通路的表达,黄芩苷、栀子苷及其7:3配伍能通过下调5-LOX炎症通路的表达促使M1型小胶质细胞向M2型极化且黄芩苷/栀子苷7:3配伍可以直接保护损伤的神经元细胞,也可通过小胶质细胞的M2极化间接保护损伤的神经元细胞。