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目的：
1.研究弱精子症男性不育患者精子线粒体DNA(mtDNA)大片段缺失的发生情况。
2.探讨mtDNA大片段缺失与精子活动力之间的关系及其与男性不育的关系。
方法：
1.收集70例精子活动力低下的精液标本和41例精子活动力正常的精液标本。禁欲3-4天后手淫获取。
2.提取精液标本的基因组DNA。
3.长片段PCR扩增针对线粒体基因缺失热点区域nt5701-15720进行缺失筛查。
4.利用T-A克隆技术对PCR纯化产物进行测序分析来确定缺失断裂位点。
5.利用Gel-Pro软件对缺失样本PCR产物进行mtDNA突变比例分析。
6.调查并收集精子活动力低下组和精子活动力正常组的临床资料及精液指标分析结果。
结果：
1.在研究中发现有11例存在mtDNA的大片段缺失，其中在70例弱精子症患者中发现10例存在mtDNA大片段缺失，41例正常活动力精子标本中具有mtDNA大片段缺失1例。其中2例标本测序结果显示，缺失区域分别位于mtDNAnt6145-14620之间及nt6173-15501，长度分别为8476bp和9328bp，提交到www.mitomap.org，尚未见报道过，为新的mtDNA突变。
2.mtDNA8476bp缺失和9328bp缺失在精子活动力低下组与活动力正常组之间的差别有显著性意义(P＜0.05)；被筛查到的缺失样本在活动力正常组中发生率2.4％，在活动力低下组中发生率14.3％，两者之间有显著性差异(P＜0.05)。
3.在精子活动力低下和精子活动力正常的精子中都发现mtDNA的缺失。应用Gel-Pro软件对缺失样本的PCR产物进行突变比例分析，分析结果为：在活动力低下的精子组发现的10例缺失样本突变型mtDNA的比例高于活动力正常的1例精子突变型mtDNA的比例。至于引起精子活动力低下以及男性不育的线粒体DNA突变阈值是多少，还有待于进一步研究。
结论：
1.研究中发现了mtDNA8476bp和9328bp缺失，分别位于mtDNA6145-14620和6173-15501区域，为新发现的mtDNA的缺失。与以往报道过的线粒4977bp、7345bp以及7599bp缺失相比较，缺失区域增大，累及了线粒体复合基因COⅠ、COⅡ、ATPase6/8、COⅢ、ND3、ND4L、ND4、ND5和ND6基因以及3个非编码区和8个tRNA基因。
2.在精子活动力低下组中发现mtDNA大片段缺失频率显著高于精子活动力正常组，推测本文发现的mtDNA8476bp和mtDNA9328bp缺失对精子活动力的降低有一定的影响。