【摘 要】
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从亚高山草甸土壤采集不同雪被厚度条件下的土壤14份,分离纯化可培养土壤细菌,采用BOXAIR-PCR、16S rDNA PCR-RFLP,代表菌株序列分析等方法研究了供试细菌的群落结构和系统发
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从亚高山草甸土壤采集不同雪被厚度条件下的土壤14份,分离纯化可培养土壤细菌,采用BOXAIR-PCR、16S rDNA PCR-RFLP,代表菌株序列分析等方法研究了供试细菌的群落结构和系统发育。进而,应用未培养PCR-DGGE技术,对供试土壤的细菌进行了研究,分析了不同雪被厚度下土壤细菌群落结构差异。结果如下:(1)从供试土样中分离获得了86株细菌,其中革兰氏阴性(G-)细菌有70株,革兰氏阳性(G+)细菌有16株。(2) BOXAIR-PCR聚类分析中,11株细菌未扩增成功,75株细菌在85%相似性水平上分为9个遗传群;分离自不同处理的细菌主要聚集在群1和群2。(3)根据BOXAIR-PCR结果,选择68株细菌进行16S rRNA PCR-RFLP分析。在88%相似性水平上68株细菌分为10个遗传群,这与BOXAIR-PCR聚类分析结果基本一致。(4)根据以上结果,选择19个代表菌株测序,初步确立了部分菌株的系统发育地位和分类地位。19个代表菌株分属于假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、紫色杆菌属(Janthinobacterium),其中假单胞菌属(Pseudomonas)为优势菌群。(5) DGGE分析中,条带类型较为丰富,但共有条带较多,条带类型未见显著差异,其中人工雪和自然雪条带类型及多样性指数差别不大,而无雪土壤中呈现较大的变化。对特异性DGGE条带克隆测序,结果表明,这些细菌主要分布于土壤杆菌属(Agrobacterium),假单胞菌属(Pseudomonas),以及一些不可培养细菌和放线菌。(6)结果表明,不同雪被厚度覆盖下,亚高山草甸土壤细菌种群结构无明显变化,但对细菌的分布比例影响较大,有雪被土壤与无雪被土壤中不同种属细菌分布的比例明显不同。
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