论文部分内容阅读
我国传统中药常以复方的形式发挥作用,其中以汤剂为甚,常以几味中药按照君臣佐使的配伍原则以一定的比例熬制而成,起到增加疗效降低副作用的治疗目的。栀子柏皮汤为中国传统中药中有名的复方,出自《伤寒论》,由汉代名医张仲景论著,按照君臣佐使的配伍原则制成,君药臣药使药分别为栀子、黄柏和甘草,分别按照10：6：3的比例煎煮熬制,主要用于抗炎解热、除湿祛黄疸等。虽然栀子柏皮汤的药理作用已被广泛研究,但是其抗肝纤维化作用、主要成分跨膜转运特点以及可能存在的相互作用鲜见报道,本文主要从两部分展开研究。1.栀子柏皮汤不同配伍对肝纤维化的治疗作用研究采用四氯化碳(CCl4)致小鼠肝纤维化模型为对象,加药组灌胃给予不同配伍组合的栀子柏皮汤,观察栀子柏皮汤各配伍组对肝纤维化小鼠的治疗作用；对照组给与相同剂量的橄榄油。应用试剂盒检测相关肝纤维化及炎症指标,运用Masson染色以及HE染色检测小鼠肝脏的肝纤维化组织生理变化,Western blot法检测Ⅰ型胶原及α-SMA蛋白的表达水平。结果发现栀子柏皮汤的不同配伍组均可不同程度的降低小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、羟脯氨酸(Hyp)及透明质酸(HA)水平,改善小鼠肝脏的病理组织变化,其中栀子黄柏甘草三味药物的配伍组,成剂量依赖性降低ALT、AST、Hyp及HA水平,(P<0.01),并能显著抑制肝组织中Ⅰ型胶原和α-SMA的蛋白表达(P<0.01),结果提示三味药物配伍的降低效果最明显。通过检测转化生长因子β1(TGF-β1)的表达,发现栀子柏皮汤亦可明显降低血清中TGF-β1的水平。此部分实验表明,栀子柏皮汤不同配伍组均能不同程度改善小鼠肝纤维化,栀子黄柏甘草三味药物配伍组合治疗小鼠肝纤维化效果最佳,栀子柏皮汤的抗肝纤维化作用可能与其降低了TGF-β1水平有关。2.栀子柏皮汤主要成分的渗透特点和相互作用研究采用MDCK的细胞单层模型为对象对栀子柏皮汤主要成分(栀子苷、小檗碱、甘草酸)的渗透特点进行探究。研究发现,栀子柏皮汤三种活性成分在细胞模型双侧的转运均呈浓度依赖性,在4℃以及加入ATP抑制剂的条件下,小檗碱和甘草酸AP→BL侧的渗透率明显下降。并且小檗碱和甘草酸的渗透率分别被P-gp和MRP2蛋白抑制剂所抑制,表明P-gp和MRP2蛋白可能分别参与了小檗碱和甘草酸转运。实验发现,栀子苷可能是通过被动转运的方式通过MDCK单层细胞。并且当共同孵育栀子苷、小檗碱和甘草酸时,发现三者之间有协同促进作用,此相互作用可能与打开细胞间缝隙连接有关。