目的:研究PD-L1在肝癌干样细胞（Liver cancer stem-like cells,LCSLC）中的表达及其对LCSLC肿瘤干细胞特性和肿瘤生物学功能的影响,探索LCSLC中调控PD-L1表达变化的上游信号通路以及PD-L1调控LCSLC干细胞特性和肿瘤生物学功能的下游分子机制。方法:采用无血清球培养法获得LCSLC,并用流式细胞技术检测CD133等干性标志物分子的表达,利用Western blot和RT-q PCR检测LCSLC干性特征分子的表达,通过肿瘤细胞功能实验检测LCSLC肿瘤生物学功能变化,确认所获得LCSLC具备肿瘤干细胞特性;分别利用Western blot和RT-q PCR检测PD-L1在LCSLC中的表达,用细胞信号通路抑制剂处理LCSLC后,明确介导PD-L1表达变化的相关上游信号通路;利用siRNA下调LCSLC中PD-L1的表达,检测干性特征分子的表达变化,并进一步检测LCSLC体内外肿瘤生物学功能变化以及细胞信号通路的变化。结果:流式细胞技术检测发现LCSLC中CD133的表达明显升高（p<0.01）,Western blot和RT-q PCR检测发现,LCSLC中CD133、Nanog、Oct4A以及Snai1的表达明显高于普通肝癌细胞Hep G2（p<0.05或p<0.01）,LCSLC的细胞成球、迁移、侵袭、克隆集落形成、增殖以及小鼠体内成瘤能力明显提高（p<0.05或p<0.01）,细胞周期检测显示LCSLC有更多的细胞停滞于G0/G1期（p<0.05）;Western blot和RT-q PCR检测发现PD-L1在LCSLC中表达显著升高（p<0.05）,p-STAT3和p-Akt在LCSLC上的表达较Hep G2组明显上调,利用抑制剂分别降低STAT3和Akt磷酸化水平以后,PD-L1的表达水平均出现显著下调（p<0.05）,相反,p-ERK1/2在LCSLC上的表达较Hep G2组下调,用抑制剂处理以后,PD-L1的表达水平未发生显著变化（p<0.05）;利用siRNA下调LCSLC中PD-L1的表达后,CD133、Nanog、Oct4A以及Snai1的表达明显降低（p<0.05）,LCSLC的细胞成球、迁移、侵袭、克隆集落形成、增殖和小鼠体内成瘤能力显著降低,并促使LCSLC从G0/G1期向S期转变,促进LCSLC的凋亡（p<0.05或p<0.01）,同时,p-STAT3和p-Akt的表达水平也随之降低,而p-ERK1/2和β-catenin的表达水平未发生显著的变化（p<0.05）。结论:我们利用球培养法富集培养获得CD133+的LCSLC,CD133+LCSLC较普通肝癌细胞Hep G2具有更高的干性分子表达和更强的体内外肿瘤生物学功能,表明我们所获得的CD133+LCSLC具有肿瘤干细胞特性;PD-L1在LCSLC中的表达显著升高,这一效应由JAK/STAT3和Akt信号通路所介导;LCSLC中PD-L1能够促进CD133等干性标志分子的表达,维持LCSLC的肿瘤干细胞特性,促进其体内外肿瘤生物学功能;LCSLC中PD-L1能够进一步激活JAK/STAT3和Akt信号通路,可能是其维持LCSLC肿瘤干细胞特性、促进其体内外肿瘤生物学功能的潜在分子机制。