第一部分,表达PPARγ1全长基因的质粒构建及在转染的系膜细胞中的功能鉴定目的.过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator- Activated Receptors γ, PPARγ1)属于配体激活的核受体超家族成员之一.通常所说的 PPARγ就是 PPARγ1. PPARγ具有两种配体,一种是天然性配体,如:游离脂肪酸及其代谢产物、15d-PGJ2;另一种是合成性药物性配体,即噻唑烷二酮类药物(TZDs),与天然性配体相比较,TZDs类药物具有亲和性高、特异性强的特点.既往研究认为 PPARγ的作用与主要与脂质转运和代谢途径有关.近年来研究发现 PPARγ与一些疾病如糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化、高血压及某些恶性肿瘤的发生也有密切的关系,而且其作用不局限于代谢效应,可能对炎症、增殖、硬化等的发生发展具有直接的、非代谢性的对抗效应.国外大多数学者认为TZDs类药物是通过 PPARγ的激活而产生相应的作用,但是有少数研究结果指出以往认为的 PPARγ的作用可能只是TZDs类药物的自身作用而非 PPARγ1的直接作用,而目前绝大多数的研究仍然用的是TZDs类药物.为了明确这个疑问,我们构建了 PPARγ1全长表达基因的质粒,转染系膜细胞鉴定质粒的功能,为进一步探讨 PPARγ1在肾脏的作用机制提供有利的工具. PPARγ1全长表达基因质粒的构建为探讨 PPARγ1的机制提供了有利的工作.第二部分, PPARγ1过表达抑制高糖诱导的系膜细胞外基质的产生.PPARγ1的外源性配体噻唑烷二酮类化合物(thiazolidinediones, TZDs)类药物目前已作为胰岛素增敏剂而广泛应用于临床糖尿病的治疗.近年来一些动物实验和临床研究显示,TZDs在不同的疾病状态下具有一定的肾脏保护作用,诸如糖尿病、高血压、肾大部切除大鼠模型和肾炎大鼠模型等,但其具体机制不清楚.基于上述,我们应用基因转染技术将 PPARγ1的全长表达基因转入大鼠系膜细胞,排除体内各种干扰因素,探讨 PPARγ1对高糖诱导的系膜细胞外基质的非代谢性作用.在不影响糖代谢的情况下, PPARγ1通过抑制ERK/AP-1及NFκB等信号的传递,来抑制高糖刺激下的系膜细胞细胞外基质的合成,增加细胞外基质的降解,减少细胞外基质的积聚,同时降低AT1的蛋白表达.这为 PPARγ1具有直接抗硬化非代谢性效应的推测提供了体外依据.第三部分, PPARγ1过表达抑制血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞外基质的产生.近年来研究发现 PPARγ的配体在糖尿病肾病和非糖尿病肾病动物模型中均有不依赖于降血压、降血糖或降血脂的肾脏保护作用,能显著抑制各种损伤导致的肾小球硬化.在这些肾病模型中肾内局部的RAS都受到了激活,并且作为局部RAS系统最主要的效应物血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能够诱发或加重细胞外基质在肾脏的积聚.我们应用现代基因转染技术将 PPARγ1的全长表达基因转入大鼠系膜细胞,替代目前存在较大争议的药物和天然配体干预方法,来探讨 PPARγ1对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞细胞外基质的抑制作用. PPARγ1过表达能够通过降低AT1受体的蛋白表达来抑制血管紧张素Ⅱ刺激下的系膜细胞细胞外基质的合成,增加细胞外基质的降解,减少细胞外基质的积聚,具有直接抗硬化的非代谢性效应.作为其配体的吡格列酮在其达到一定药物浓度时通过对PPARγ1的激活也具有以上的作用.