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目的探讨共沉淀法合成的明胶-羟基磷灰石支架材料的理化性质及其对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖分化的影响,并通过动物实验验证该支架材料促进大鼠颅骨缺损的骨修复。方法全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞;对第2代细胞表面标记分子进行流式细胞术分析;P2代进行矿化诱导21天,茜素红染色分析细胞的成骨分化潜能;采用不同循环次数的共沉淀法制备复合羟基磷灰石的明胶载体并对材料理化表征进行分析;采用扫描电镜、CCK-8、死活实验观察材料对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响,碱性磷酸酶定量分析材料对其成骨分化的影响。成年雄性SD大鼠12只,每组4只,随机分成A、B、C三组。所有大鼠均在左右颅骨处去骨,造直径为5mm,深度约为3mm的圆形骨缺损。A组左侧放置r BMSCs-1HA-Gel复合物,右侧为阴性空白对照组;B组组左侧放置r BMSCs-Gel复合物,右侧为阴性空白对照组;C组左侧放置r BMSCs-1HA-Gel复合物,右侧放置r BMSCs-Gel复合物。术后12周行摄CBCT,然后取材,并制作组织学切片进行HE、Masson染色。对两组大鼠颅骨缺损处的骨缺损修复、愈合情况进行评价。上述所得实验数据均用SPSS17.0进行统计学分析,检测数据均以(?)±s表示,多组间差异的比较采用双因素重复测量资料的方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1、全骨髓贴壁法培养出原代细胞。流式细胞术结果显示该细胞高表达干细胞表面标记分子CD29,CD90;低表达血管内皮细胞表面标记分子CD45,CD11b。用成骨诱导液对第2代大鼠骨髓间充质干细胞细胞进行诱导后,茜素红染色后有矿化结节生成,说明其具有向成骨细胞分化的能力。2、根据自然离子不同交替次数,制备出1循环材料、2循环材料、3循环材料和对照组明胶材料,扫描电镜显示复合支架材料表面有颗粒物沉淀;红外光谱显示复合材料中存在较强的化学键合;X射线衍射显示颗粒沉淀为羟基磷灰石。1循环复合材料孔隙率接近人松质骨;体外降解实验显示该材料具有可降解性。与对照组相比较,扫描电镜观察结果显示大鼠骨髓间充质干细胞在1循环材料上黏附和伸展情况最良好;CCK-8实验结果显示1循环材料促进细胞增殖,ALP实验结果显示与1循环材料增强碱性磷酸酶的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。3、CBCT及切片染色结果显示,实验组新骨形成速度及骨密度优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用共沉淀法合成的1HA-Gel复合支架材料定向诱导后的r BMSCs具有良好的生物相容性,促进r BMSCs成骨分化,并且r BMSCs-1HA-Gel能有效地修复大鼠颅骨缺损,有望成为新型的骨组织工程支架材料。