【摘 要】
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第一章盐藻钠/磷共转运通道基因的分离及功能分析利用通过抑制差减杂交(SSH)方法得到的两个明显受高盐胁迫诱导的差异片段A60及CP1F1为探针,我们从盐藻的cDNA文库中分离得到
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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第一章盐藻钠/磷共转运通道基因的分离及功能分析利用通过抑制差减杂交(SSH)方法得到的两个明显受高盐胁迫诱导的差异片段A60及CP1F1为探针,我们从盐藻的cDNA文库中分离得到两个钠/磷共转运通道基因全长cDNA(DsSPT1和DsSPT2),它们分别编码一个由672个氨基酸组成的蛋白DsSPT1和一个由675个氨基酸组成的蛋白DsSPT2.酵母功能表达结果显示:DsSPT1和DsSPT2这两个基因均使盐敏感突变体G19变得更敏感.上述结果表明,我们从盐藻中首次分离得到了两个受NaCl和无机磷差异调控的无机磷转运通道基因cDNA.第二章盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因cDNAs的分离及初步分析根据衣藻NADP-甘油醛3-磷酸脱氢酶基因cDNA(AB035312)的保守区域合成引物,利用RT-PCR的方法他离得到衣藻CC2677的甘油醛3-磷酸脱氢酶基因片段(CRGAPAf),然后将CRGAPAf作为探针从盐藻的cDNA文库中分离得到了20个克隆,根据酶谱将其分为4种类型,从中选取两个插入片段大小和酶谱不一样的克隆(DsGapA1,DsGapA2)进行测序分析,cDNA全长分别为1330bp和1478bp,它们的差异集中在3末端非翻译区,在编码区只有一个碱基的差异,其编码的蛋白序列完全相同,共376个氨基酸,与衣藻的甘油醛3-磷酸脱氢酶(RAA94304)蛋白序列的同源性高太72％.根据预测,其N端包含有一个长35个氨基酸的叶绿体转运肽序列.Northern分析表明,DsGapA1,DsGapA2的表达受到磷饥饿的诱导,但不受NaCl渗透震荡的影响,这表明盐藻甘油醛3-磷酸脱氢酶的调控可能主要发生在蛋白水平上.系统进化分析为盐藻在植物从低等水生植物到高等陆生植物进化过程中的地位提供了进一步的分了证据.将DaGapA1的编码区克隆到原核表达载体pTWIN1中,并在BL21(DE3)中得到成功表达.
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