论文部分内容阅读
皱纹盘鲍(Haliotis discus hannaiIno)是一种名贵海产品,富含蛋白质、脂肪、人体必需的微量元素,营养价值极高,开发利用价值大。近年来,市面上作为添加辅料的抗氧化剂多为人工合成,因此制备天然抗氧化蛋白已成为研究热点,可为食品添加剂和化妆品产业带来巨大的商业潜力。本研究以皱纹盘鲍为原料,通过构建真核表达载体,体外表达、优化其表达与纯化工艺,对获取的蛋白纯品进行活性评价,为食品添加剂和化妆品的辅助原料研发提供参考。主要研究内容和结果如下:1.对皱纹盘鲍Cu/Zn-SOD和TPX2进行真核表达载体的构建、重组表达、纯化以及工艺条件优化。结果表明:Cu/Zn-SOD在0.5%甲醇浓度,pH6条件下28 ℃培养24 h表达量最高;TPX2在2.0%甲醇浓度,pH7条件下28 ℃培养72 h表达量最高。2.比较皱纹盘鲍Cu/Zn-SOD在不同Cu2+浓度下的活性,对其热稳定性进行评价以及测定抗氧化能力。同时,也对TPX2进行抗氧化能力的测定。结果表明:1.0%Cu2+浓度下的Cu/Zn-SOD活性最强;温度在80 ℃时,Cu/Zn-SOD活性保持在50%以上;Cu/Zn-SOD和TPX2清除自由基的能力均高于Vc,清除羟自由基能力Cu/Zn-SOD是Vc的3倍,TPX2是Vc的9倍;清除超氧阴离子自由基能力 Cu/Zn-SOD 是 Vc 的 16 倍。3.采用MTS/PMS法进行细胞水平安全性及活性评价,另外研究重组蛋白是否引起马血溶血。结果表明:100 μg/mL的Cu/Zn-SOD和TPX2均对L929细胞和L02细胞没有毒害作用,不会引起马血细胞溶血,并且对H202引起的细胞损伤均有一定的保护作用。由此可见,皱纹盘鲍Cu/Zn-SOD和TPX2是安全的抗氧化物,适合作为食品添加剂和化妆品的辅助原料。