HPLC-电化学检测器测定单胺类神经递质的研究

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单胺类神经递质是哺乳动物中枢神经系统中调节神经生理功能的重要物质,包括肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺等。由于此类物质和很多疾病密切相关,研究单胺类神经递质及其代谢产物在生物体内浓度的变化对疾病的诊断治疗具有重要意义。本文采用高效液相色谱—库仑阵列电化学检测器(HPLC—ECD)对小鼠脑组织中的单胺类神经递质及其代谢产物的检测方法进行了系统研究。通过对样品的前处理方法的改进,对检测电极电势的选择和流动相条件的优化,确定了小鼠脑组织中九种神经递质及其代谢产物的含量的检测条件。将健康小鼠拉颈处死,立刻迅速的分离出脑组织,用预冷的生理盐水洗净,用滤纸吸干水分,-80℃保存。分析时取出,称重,放入玻璃匀浆器中,加预冷的0.1mol/L高氯酸溶液匀浆,10000×g低温(4℃)离心10min两次,收集上清液,用0.22μm微孔滤膜过滤,然后用液相色谱-电化学检测器检测。液相色谱的流动相组分A为50mmol/L乙酸钠水溶液(用乙酸调至pH 5.0),组分B为甲醇,采用的梯度为:0-15min,B的体积浓度由4%上升至15%;15-23min,B的体积浓度保持在15%;流速为1.0mL/min。四组电极的检测电势分别为0mV、200mV、500mV和700mV。在此条件下,小鼠脑组织中的九种单胺类神经递质及其代谢产物的回收率都在90%以上;检测限为2-8ng/mL。本文对所建立的方法均进行了周密的验证,结果显示此方法准确、灵敏,操作简单,方便快捷,适宜生物样品的检测。
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