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黑色素瘤分化相关基因7（melanoma differentiationassociated gene-7，mda-7）是通过消减杂交的方法从一种黑色素瘤细胞中鉴定出来的一种特异性的靶肿瘤细胞基因。后来发现mda-7与IL-10细胞因子家族基因具有同源性和亲缘关系，属于IL-10家族。因此，2001年被重新命名为白细胞介素IL-24。人类IL-24具有免疫学功能，可刺激白细胞分泌二级细胞因子及参与免疫应答，但引起人们广泛关注的是它独特的抗肿瘤作用。目前已有的许多实验表明，mda-7／IL-24蛋白具有较明显的抗肿瘤作用，能选择性地诱导多种肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长，以及引起黑色素瘤细胞终末分化，但对正常细胞无明显影响。目前在美国，mda-7基因已进入Ⅱ期临床试验阶段。D、G组染色体短臂导向基因打靶载体——pHrneo是本实验构建的一种新型的非病毒载体系统，在以往的研究中将其用于血友病及杜氏肌营养不良等单基因遗传病，取得了较理想的结果。为了进一步探讨人源基因载体pHrneo应用于肿瘤基因治疗的效果和前景，我们用PCR的方法扩增出mda-7基因，与EGFP基因融合后连入核糖体靶向性载体pHrneo，构建了肿瘤特异性基因治疗载体pHr-CMG。运用巨细胞病毒CMV启动子／增强子调控基因表达。采用脂质体转染的方法将pHr-CMG转染肝癌细胞系Bel-7402细胞，流式细胞仪检测载体表达效率，其在细胞中的表达分别用荧光显微镜、RT-PCR及Westernblotting等鉴定，Hoechst33258染色、细胞周期检测及MTT实验检测肿瘤特异性基因治疗载体pHr-CMG对Bel-7402肝癌细胞的生长抑制及其凋亡诱导作用。研究发现（1）体外转染肝癌细胞Bel-7402，流式细胞仪检测转染效率为37％-44％；（2）RT-PCR及Western blotting检测到mda-7／GFP融合基因在mRNA及蛋白质水平的表达，且通过荧光显微镜观察到绿色荧光定位在细胞质中；（3）Hoechst33258染色证实转染pHr-CMG载体可诱导Bel-7402肝癌细胞发生凋亡；（4）PI染色，流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期表明细胞有G2／M期阻滞；（5）MTT分析转染pHr—CMG载体后24小时、48小时、72小时细胞存活率为78％、22％、13％。实验结果表明人源基因载体介导mda-7基因可诱导肝癌细胞系Bel-7402发生生长抑制和凋亡，为运用此载体进行肝癌基因治疗提供了重要的实验依据。