论文部分内容阅读
共轭亚油酸(conjugated linoleic acid, CLA)是一类含共轭双键亚油酸的位置(6-8,7-9,9-11,11-13,13-15)和几何(cis,cis; cis,trans; trans,cis; trans,trans)异构体的总称,是反刍动物乳、肉中存在的天然脂肪酸。CLA具有多种有益的生理活性。研究证实了不同的CLA有不同的生理活性,已经公认的如9c,11t-CLA具有抗癌活性,抗粥样动脉硬化,免疫调节的功能；10t,12c-CLA可抑制脂肪的合成,具有减肥的作用。因而建立可靠的分析方法确定食品中共轭亚油酸异构体组成,分析CLA异构体的种类,对于研究CLA结构与生理活性的关系以及共扼亚油酸在食品中的应用,都有着十分重要的意义。乳脂肪是丰富的天然CLA的来源,全乳平均1g脂肪含CLA约有10 mg,牛奶中CLA的主要异构体是生理活性很强的9c,11t-CLA,约占90%。为分析不同乳中CLA的准确含量和类型,了解各种因素对乳及乳制品中CLA含量的影响,建立快速准确的分析方法是非常必要的。本研究采用银离子高效液相色谱法(Ag+-HPLC)法和胶束电动色谱法(MEKC)对几种奶样中主要的CLA异构体的含量进行了分析测定,研究中对乳脂的提取,样品的处理方法以及仪器分析条件进行了优化,较好地提高了分析水平,主要结果如下：1.对不同的乳脂提取方法进行比较。结果表明,在提取试剂为正己烷：异丙醇=1：1(v/v)时,采用超声波辅助提取乳脂,提取乳脂的效果最佳。2.比较不同的甲酯化方法对对乳脂中CLA的酯化效果的影响,确定NaOCH3-CH3OH进行酯化的效果较好,甲酯化较完全,并以响应面法对其进行优化,其最优条件为NaOCH3-CH3OH添加量为8.56 mL,反应温度为24.4℃,反应时间为12.8 min。3.采用一根银离子柱的Ag+-HPLC对CLA异构体进行分离,可实现对两种生理活性较强的CLA异构体9c,11t-CLA和10t,12c-CLA的初步分离。在7.812～500μg/mL范围内,HPLC分析的峰面积与9c,11t-CLA的进样量呈现良好的线性关系,可用于对样品中的9c,11t-CLA进行定量分析。4.优化了MEKC的分离条件：分离电压25 kV,柱温20℃,进样时间10 s。在优化的条件下(分离电压25 kV,柱温20℃,进样时间10 s),MEKC可达到对9c,11t-CLA与10t,12c-CLA标品的良好分离。以MEKC法对鲜奶、巴氏奶、超高温瞬时灭菌奶(UHT)中CLA含量及组成进行分析,CLA总含量(9c,11t-CLA与10t,12c-CLA含量的总和)：鲜奶为9.281 mg/g乳脂、巴氏奶为9.129 mg/g乳脂、UHT为8.631 mg/g乳脂,各奶样间9c,11t-CLA与10t,12c-CLA比例无显著差异；牛奶、水牛奶、羊奶中CLA总含量(9c,11t-CLA与10t,12c-CLA含量的总和)分别为9.220 mg/g乳脂、2.972 mg/g乳脂、6.054 mg/g乳脂,各奶样间9c,11t-CLA与10t,12c-CLA比例差异显著。5.采用Ag+-HPLC对不同处理和条件的奶样进行分析,发现热处理(巴氏杀菌、超高温瞬时灭菌)对奶中9c,11t-CLA的含量均有影响,超高温瞬时灭菌可降低CLA的含量,影响最大；保存时间也可影响奶中的9c,11t-CLA含量,随保存时间增加,各奶样中的9c,11t-CLA含量均下降；下降幅度从大到小依次为乳脂,巴氏杀菌奶,鲜奶,UHT奶；不同季节也可影响奶样中CLA含量,夏季奶中CLA含量明显高于其他季节的奶；对不同公司生产的品牌牛奶的CLA含量进行了考察,发现不同品牌牛奶CLA含量存在显著差异；检测结果也表明不同动物奶样中的9c,11t-CLA的含量也有显著差异。