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腺嘌呤核苷酸转位酶(adenine nucleotide translocator,ANT)是线粒体通透性转换孔道(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)的重要组成部分,参与调控MPTP的生理功能,可以诱导细胞凋亡,但其在植物体中发挥的作用机理并不明确。一氧化氮(nitric oxide,NO)作为气体分子,以其脂溶性的特点是三大生命信息传递信使中第一信使的一员,在植物体中介导多种生理功能,参与调控线粒体的生理功能,参与植物幼苗的生长、果实的成熟等过程;而适当浓度的外源NO能延长果实的储存时间。所以,探明NO对ANT蛋白的作用及其调控机理有助于明确ANT蛋白对肥城桃桃果实采后保鲜的影响,对优化延长桃果实储存时间的方法有重要意义。本论文中的实验均以肥城桃桃果实为实验材料。从美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)获取已知的玉米、水稻等ANT基因的mRNA序列,通过比对得到ANT的保守区序列,以该保守区序列设计兼并引物,从肥城桃桃果实提取出总RNA并克隆获得cDNA。使用RACE技术,以克隆获得的cDNA为模板,得到ANT基因的cDNA序列全长1432 bp,编码区1155 bp,共编码384个氨基酸。经模拟分析,ANT发生谷胱甘肽化反应比发生亚硝基化反应更容易进行,NO与ANT蛋白有且仅有一种可能发生相互作用。构建ANT-pET30a重组载体,导入大肠杆菌Transetta(DE3)进行蛋白表达,使用镍柱纯化目的蛋白,再经过透析复性,超滤管过滤浓缩,得到纯化复性后的ANT蛋白。利用酵母双杂交技术检验ANT蛋白和PiC蛋白之间是否能相互作用,结果显示菌株能够正常生长并且显现蓝色,表明两者可以相互作用。从NO与纯化复性后的ANT蛋白作用的荧光光谱中发现,NO可以使ANT蛋白发生荧光猝灭的现象,且属于静态猝灭。通过Scatchard模型分析得到,NO与ANT以2:1的结合形式相互作用形成复合物。从ANT实时荧光定量PCR研究中发现,15μmol L-1 NO处理降低了ANT的表达量。外源NO对肥城桃桃果实线粒体的生理生化指标的研究结果表明:经15μmol L-1 NO处理的桃果实线粒体中ROS含量明显的下降,同时增强了SOD、POD、CAT等抗氧化酶的活性,降低了线粒体中MDA的含量,减少了线粒体呼吸的耗氧量,进而降低细胞的呼吸作用。而经c-PTIO处理的得桃果实线粒体中ROS含量显著提高,同时也减弱了SOD、POD、CAT等抗氧化酶的活性,MDA的含量也明显升高,增加了线粒体的耗氧量。随桃果实储存时间的延长,线粒体膜电势整体呈下降的趋势,而15μmol L-1 NO处理有效的减缓了线粒体膜电势的降低速率。80 mmol L-1 NAC-15μmol L-1 NO协同处理可以使线粒体中ROS、MDA含量显著降低,提高SOD的活性,减缓线粒体膜电势的降低,降低线粒体的耗氧量。结果表明外源NO通过调控线粒体的各项生理功能,达到延缓肥城桃桃果实的细胞凋亡,延长肥城桃桃果实采后的储藏时间的作用。