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阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种进行性发展的神经系统退行性疾病,患者记忆力减退和认知功能障碍,并伴有社会交流和日常生活能力降低。迄今AD的致病因素仍不清楚,认为β-淀粉样蛋白毒性、氧化应激、线粒体功能失调、能量代谢障碍等都牵涉到其发病机制中。目前为止,AD还没有根治方法,现有的治疗方法也很有限。药用植物及其提取物在中枢神经系统疾病防治中的作用渐被人们关注。
文献报道,红景天苷具有抗缺氧、清除自由基、抑制细胞Ca2+升高、抑制细胞凋亡的发生、提高线粒体膜电位、调节神经内分泌免疫网络的作用,许多体外实验可见很好的保护神经细胞线粒体、抗氧化应激、促进神经干细胞向神经元方向分化的作用。破壁灵芝孢子能消除自由基、改善脑部血液循环、增加脑细胞供氧量、保护神经元的作用。本实验所用的灵芝孢子红景天精华胶囊主要成分为萌动全破壁灵芝孢子和红景天苷,我们尝试将其使用在AD患者身上,观察认知、智力的改善情况,并初步评价其对病理发生涉及到的一些因素如线粒体功能、氧化应激等的影响。
基于上述背景,本研究做了如下工作:
第一部分:灵芝孢子红景天精华对阿尔茨海默病(AD)患者血小板及血浆生化指标的影响
选取广州市老人院诊断为阿尔茨海默病患者共20例作为研究对象,MMSE评分10~19分,病情中度。在不改变患者的服药史和生活环境的情况下,添加口服灵芝孢子红景天精华胶囊4个月,服药期间行3次MMSE评分初步观察患者的病情变化。分别在服药前1天和服药完毕后1天各1次采集血液标本并收集于聚丙烯EDTA抗凝管中,低温运输和保存,并于2小时内进行血小板分离纯化及血浆的收集,所有操作均冰上进行。HPLC检测血小板内ATP水平,CM-H2DCFDA高质荧光测定法定量血小板内ROS水平,比色法测定血小板内COX活性,ELISA法检测血浆Aβ42水平,比色法检测血浆LDH水平,BCA法定量血小板总蛋白浓度作为参照。血小板内ATP水平、COX活性给药前后自身对照配对t检验无统计学意义(P>0.05),服药前后ROS相对荧光强度自身对照配对t检验P<0.05,说明服药后血小板内ROS水平较服药前显著降低。MMSE评分、血浆中的Aβ42水平和LDH水平经前后自身对照配对t检验无统计学意义。服用灵芝孢子红景天精华可降低AD患者血小板内ROS水平,提示其具有清除活性氧基团和抗氧化应激的作用。
第二部分:服用灵芝孢子红景天精华对阿尔茨海默病(AD)血小板内线粒体超微形态的影响
同第一章,选自广州市老人院病情中度的阿尔茨海默病患者共20例作观察,从中随机抽取服药前、服药后AD患者各5例以及健康对照5例做透射电镜观察血小板线粒体形态并计量分析。血小板标本采集同第一部分,分离纯化末次离心后洗涤液倒去,快速使用戊二醛前固定液固定后常规电镜标本制作。正常对照组血小板内的线粒体呈圆形或卵圆形,基质致密且均匀,嵴分布规则。服药前病人血小板内大部分的线粒体形态正常;部分线粒体肿胀,基质呈浅灰色、空白或小凝块状,嵴少或嵴断裂。服药后病人血小板内大部分的线粒体较小,其形态正常;偶见形态正常、体积较大的线粒体;少许线粒体基质呈小凝块状,嵴少。线粒体形态计量结果行独立t检验,三组别的数密度Nv、表面积密度Sv比较均无统计学的意义,服药前组别的比表面δ最小,与正常对照组和服药后组别比较均有统计学意义。以上的数据说明服药前患者线粒体单位体积有所增大,部分线粒体肿胀变性。服用灵芝孢子红景天精华后,血小板线粒体超微形态未见较服药前有恶化的表现,并可观察到一些扩大的线粒体。
结论:服用灵芝孢子红景天精可能对AD患者病情变化起一定的稳定作用,这为临床进一步应用灵芝孢子红景天精华治疗AD患者提供初步资料。