【摘 要】
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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种易培养分离的益生菌,它能通过非核糖体途径合成多种具有广谱抑菌活性的抗菌脂肽(Lipopeptide)。抗菌脂肽的稳定性好、不易产生耐药性,目前
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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种易培养分离的益生菌,它能通过非核糖体途径合成多种具有广谱抑菌活性的抗菌脂肽(Lipopeptide)。抗菌脂肽的稳定性好、不易产生耐药性,目前在化妆品、食品、畜牧业、环境防治等方面的广泛应用受到广泛的关注。本研究首先对实验室保存的一株具有广谱抑菌活性的枯草芽孢杆菌HS-A38的抗菌脂类物质进行研究。通过比较酸沉淀法与盐沉淀法,确定酸沉淀法所得抗菌脂肽粗提物更符合实验后期分析。利用薄层色谱法(TLC)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDL-TOF),确定了HS-A38的抗菌脂肽粗提物主要含有杆菌霉素(Bacillomycin)、伊枯草菌素(Iturin)和芬荠素(Fengycin)三种物质,并对粗提物的理化性质进行了分析。为获得低成本、高产量的抗菌脂肽,实验对菌株HS-A38的发酵工艺进行了详细的优化。通过单因素实验和响应面实验,得到的最优培养基组成为:土豆淀粉、大豆蛋白胨,葡萄糖、豆粕粉、MnSO4、MgCl2、CaCl2、ZnSO4、K2HPO4。通过正交实验对发酵工艺进行优化,优化后发酵工艺为:30℃,180 r/min条件下培养60 h后,以6%接种量接种于优化后培养基(60 mL/250 mL三角瓶)中。实验采用TLC和MALDI-TOF质谱对培养基优化前后抗菌脂肽组分进行对比分析。采用半定量PCR法对培养基优化前后进行分析,通过对发酵过程中产脂肽类物质几个关键酶基因的表达水平差异研究。结果表明:新型培养基Ipa-14(4-磷酸泛酰巯基乙胺转移酶)和BYA的表达量在发酵前期明显增加。结果表明,优化后,主要增加的抗菌脂肽类物质主要为伊枯草素(Iturin)、杆菌抗霉素(Bacillomycin D)和FengycinA和FengycinB。抗菌脂肽的理化性质分析以及培养基的优化为现代低成本高效工业化生产脂肽类化合物提供了有利的参考价值,为脂肽类化合物的广泛使用提供了一定的使用依据。
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