乌头类中药是药典收录的一类常用药物，中国传统医学认为乌头类中药具有祛风除湿，温经止痛的功效，现代医学研究表明其具有镇痛、强心、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等多种药理作用，临床应用前景十分广泛。但该类药物毒性大，其中生川乌、生草乌、生附子属于国家特殊管理的毒性中药。乌头类中药的主要毒性成分为乌头碱，中枢神经系统和心血管系统是其毒性作用的主要靶器官。而关于其是否具有雄性生殖毒性，国内外文献均未见相关研究报道。为了解乌头类中药对雄性生殖系统的影响，本课题选用三种具有代表性的乌头类中药盐附子、生川乌、生草乌及其主要毒性成分乌头碱，采用大鼠体内试验和大鼠睾丸支持细胞、间质细胞培养体系从体内和体外两方面评价其雄性生殖毒性及作用机制。大鼠体内试验中的雄性生殖毒性研究采用SD大鼠，设盐附子1．55、3．09、6．18g生药／kg，生川乌3．3、6．5、13．0g生药／kg，生草乌2．1、4．2、8．3g生药／kg及蒸馏水对照组，连续给药3个月，停药恢复观察1个月。结果显示：给药结束时各剂量组的睾丸和附睾的脏器系数均较对照组有所下降，且生草乌高剂量组(8．3g生药／kg)所出现的差异具有统计学意义(P＜0．05)，恢复期各剂量组的睾丸和附睾的脏器系数与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)，给药结束时和恢复期结束时乌头类中药各剂量组睾丸未见明显的组织病理学改变。乌头碱对大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)毒性研究采用18～20日龄SD大鼠，通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化，采用H．E．染色、瑞氏—吉姆萨染色进行细胞鉴定。用MTT法检测浓度为0、5×10~1、5×10~2、5×10~3、5×10~4ng／ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响，并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。结果显示：与溶剂对照组(DMSO)相比，48h时，高剂量乌头碱(5×10~3、5×10~4ng／ml)抑制支持细胞的增殖(P＜0．01)，低剂量乌头碱(5×10~2ng／ml)表现出对支持细胞增殖有轻微促进作用；24h时，各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖亦表现出轻微促进作用。24h时，乌头碱各剂量组乳酸分泌量均增加，与溶剂对照组(DMSO)相比，差异有统计学意义(P＜0．01)，乌头碱剂量为5×10~4ng／ml时，乳酸分泌量增加率降低。乌头碱对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)毒性研究采用成熟雄性SD大鼠，通过Percoll不连续密度梯度离心进行细胞纯化，采用3β-羟类固醇脱氢酶染色进行细胞鉴定。用MTT法检测浓度为0、5×10~1、5×10~2、5×10~3、5×10~4ng／ml的乌头碱对大鼠睾丸间质细胞活力的影响，并用丙二醛试剂盒、超氧化物歧化酶试剂盒检测乌头碱对间质细胞脂质过氧化的影响以及采用睾酮放免试剂盒检测乌头碱对间质细胞睾酮分泌功能的影响。结果显示：24h和48h时，乌头碱各剂量组对大鼠睾丸间质细胞活力无明显影响，与溶剂对照组(DMSO)相比，差异无统计学意义(P＞0．05)；24h时，乌头碱各剂量组对大鼠睾丸间质细胞的MDA含量和SOD活力无明显影响，与溶剂对照组(DMSO)相比，差异无统计学意义(P＞0．05)；4h时，乌头碱各剂量组对hCG诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌无明显影响，与溶剂对照组(DMSO)相比，差异无统计学意义(P＞0．05)。综合以上体内和体外试验结果，可以得出如下结论：在体内试验中，乌头类中药盐附子、生川乌、生草乌各剂量组对雄性大鼠性腺无明显毒性作用；体外试验表明，乌头碱各剂量组(5×10~1、5×10~2、5×10~3、5×10~4ng／ml)对Leydig细胞无明显毒性作用；仅高剂量乌头碱(5×10~3、5×10~4ng／ml)对Sertoli细胞具有一定毒性作用。