艾灸调控实验性RA模型T细胞功能的PD-1/PD-L1机制研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:jnyinli
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目的:本研究在中医针灸理论的指导下,以‘PD-1/PD-L1信号通路--T细胞功能—抗炎效应”为研究主线,选择PD-1、PD-L1为研究切入点,紧扣RA免疫反应之“因”和滑膜炎症病理反应之“果”这两个关键环节,运用免疫组化、Elisa等方法技术,探索艾灸对实验性RA模型T细胞功能的影响及其PD-1/PD-L1负性调控机制,深化灸法治疗RA的作用机理研究。方法:以日本大耳白兔30只作为实验对象,随机分为正常对照组(简称“对照组”)、RA模型组(简称“模型组”)、艾灸治疗组(简称“治疗组”),1 0只动物/组。将弗氏完全佐剂(CFA)按0.5mL/kg体重的剂量注入模型组和治疗组各家兔的双后膝关节腔内建立RA模型。从实验第8天开始对治疗组各家兔采用艾炷灸“肾俞”、“足三里”穴进行治疗,每穴连续施灸5壮,1次/d,6d为1疗程,总计3疗程,疗程之间休息1d。分别于实验第1、7、14、21、28天观察RA家兔的整体状况、膝关节周长,光镜下观察滑膜组织炎症病理形态;于实验第28天,进行滑膜组织、滑膜液、脾脏、血清样本采集,使用Elisa双抗夹心法检测滑膜液中T细胞促炎因子IL-2、IFN-γ、IL-17含量以及血清中p56lck和p59舯的含量,采用S-P免疫组化法检测脾脏组织mPD-1、mPD-L1的蛋白表达,使用Elisa双抗夹心法检测血清和滑膜液sPD-1、sPD-L1的含量,采用S-P免疫组化法检测滑膜组织中NF-κBp65、IKKβ的蛋白表达。结果:1.艾灸可以明显改善RA家兔全身状况和关节滑膜炎症病理变化,显著降低膝关节肿胀。2.滑膜液T细胞促炎因子含量检测结果显示:与对照组比较,模型组IL-2、 IFN-γ、IL-17含量均显著升高(P<0.01);与模型组比较,治疗组IL-2、FN-γ、IL-17含量均明显降低(P<0.05)。3.血清中T细胞识别信号转导激活的相关分子检测结果显示:与对照组比较,模型组血清中p56lck、p59f-含量均明显升高(P<0.0缈;与模型组比较,治疗组血清中p56lck、p59fy“含量均明显降低(P<0.05)。4.脾脏组织中mPD-1、mPD-L1表达检测结果显示:与对照组比较,模型组mPD-1、mPD-L1的蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,治疗组mPD-1表达有上升趋势(P>0.05),mPD-L1表达明显升高(P<0.05)。5.血清和滑膜液中sPD-1、sPD-L1表达检测结果显示:与对照组比较,模型组血清和滑膜液sPD-1和sPD-L1含量均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,治疗组血清和滑膜液sPD-1含量均明显降低(P<0.05),血清和滑膜液sPD-L1均呈下降趋势,无统计学意义(P>0.05)。6.滑膜组织中NF-κB通路相关分子检测结果显示:与对照组比较,模型组滑膜组织中NF-κBp65、IKKβ的蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,艾灸组NF-κBp65和IKKβ表达明显降低(P<0.05)。结论:1.艾灸具有明显的抗炎效应,对滑膜炎症和T促炎因子的分泌起有效抑制的作用。2.艾灸可能通过增强PD-1/PD-L1信号通路的负性信号传递来抑制T细胞的过度活化。3.艾灸可能通过有效抑制T细胞的活化调控滑膜细胞NF-κB通路的异常激活,从而实现抗炎效应。
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