臂形草属种质资源遗传多样性研究

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臂形草(Brachiaria Griseb)是禾本科(Gramineae) C4型高光效的一年或多年生植物,主要分布于热带及亚热带地区,可用于绿地、庭院和水土保持,是优良的放牧型和水保型牧草。鉴于臂形草在分布范围和生长特性,本研究收集45份种质(20份国外引种材料和25份中国海南岛野生资源)为供试材料,从形态学水平和分子水平进行多样性分析。旨在探究臂形草种源的遗传关系,筛选出优异种质,为臂形草新品种选育及其开发利用奠定基础。主要研究结果如下:(1)对45份种源的20个形态指标进行分析表明:臂形草形态特征存在丰富的变异,除叶色外,其它的变异系数都大于20%,其中以最长茎伸展长度、叶长、叶鞘长度的变异幅度最大,不同种质间差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)差异,对20个形态指标进行聚类分析,将引进种和本地种分开。(2)优化了臂形草属植物的DNA提取方法,并建立了AFLP反应体系:酶切{模板DNA500ng.10xNEB缓冲液2μL、100xBSA0.2μL、Ecor I (2U)/Mse I (1U)加ddH2O至20μL}37℃温浴1h;连接(T4连接酶400U、10xbuffer2μL、接头2μL、双酶切产物5μL加ddH2O至20μL)室温连接10min;预扩增(连接产物5μL、引物2μL.2xEasyTap PCR SuperMix10μL加ddH2O至25μL);预扩增产物稀释50倍;选择性扩增(预扩增产物3μL、引物2μL、2xEasyTap PCR SuperMix1OμL加ddH2O至20μL)加入8μL LoadingBuffer,95℃变性5min,立即冰浴,6%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析;银染聚丙烯酰胺凝胶。以次体系为基础,对AFLP引物进行筛选,从144对引物中共筛选出6对谱带清晰、重复性好和多态性高的引物。(3)利用筛选出的6对引物组合对45份种质进行扩增,共扩增出342条谱带,平均扩增出57条谱带,E-ACT/M-CAT扩增出的条带数最多,有70条,E-ACA/M-CTC扩增出的条带数最少,只有44条。平均多态性条带数为52.83。E-ACT/M-CAT扩增出的多态性比率最高,有66条,E-ACC/M-CAG扩增出的多态性条带数最少,有39条。E-ACA/M-CGC扩增出54条谱带,其多态性达96.30%, E-ACC/M-CAG扩增出47条谱带,其多态性仅有82.98%,6对引物扩增的平均多态性为92.31%。45份材料间的遗传相似系数(GSC)范围为0.49-0.89,平均达0.70。利用UPGMA法作聚类分析,在GSC值为0.682时,45份臂形草材料可以分为5类:巴拉草为第一类,多枝臂形草为第二类、臂形草为第四类,四生臂形草为第五类,国外引进材料为第六类。当GSC=0.704时,第五类中CIAT1633湿生臂形草、网脉臂形草和Humidicola湿生臂形草分为一类。在GSC值为0.70时,第四类中7份四生臂形草又明显的分为一类。主成份分析结果与聚类分析结果相一致,直观表明了不同臂形草种源间的亲缘关系。(4)在本次臂形草研究范围中,海南岛野生臂形草共采集3个种25份材料,来自不同县市不同生境,经过45份种质的形态学和AFLP分子标记分析,结果明显的将本地种和引进种分开,根据分子标记也将湿润地区和半湿润地区的四生臂形草分开。
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