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研究目的:探索新的有价值的肝癌(Liver Cancer)分子生物学标志物,研究肝癌中PCDH8基因启动子的甲基化状态及其蛋白的表达,并且分析PCDH8甲基化与肝癌临床病理各参数的关联。研究方法:(1)运用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)法检测42例肝细胞肝癌(HCC)、8例肝内胆管细胞癌(CC)和50例正常肝组织中3个抑癌基因PCDH8、HIN1、RAR-β2启动子区的甲基化状态。(2)运用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术检测肝癌组织和正常肝组织中PCDH8蛋白的表达水平。(3)评估PCDH8启动子甲基化与肝癌患者临床病理特征的关系。(4)运用单变量和多变量Cox比例分析来确定肝癌独立预后因素,评估PCDH8甲基化与肝癌患者的总生存期的关系,评估甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)水平、肿瘤的大小(体积或最大径)、肿瘤的分化程度(或异型性)等与肝癌患者的总生存时间的相关性。结果:(1)在肝癌中,PCDH8存在着较高的甲基化率(37/42(88.1%)HCC,7/8(87.5%)CC),但是只有16/50(32%)的正常肝组织发生甲基化,PCDH8基因启动子的甲基化率在肝癌患者和正常肝组织之间具有显著性差异,差异具有统计学意义(P<0.001)。而其他抑癌基因HIN1和RAR-β2的甲基化率在肝癌患者和正常肝组织之间无显著差异,无统计学意义。(2)肝癌组织PCDH8蛋白表达减少。大部分的正常肝组织PCDH8蛋白表达呈强阳性(43/50,86%),但是在肝癌组织中,大部分病例PCDH8蛋白表达缺失(35/42HCC病例,83.3%;7/8 CC病例,87.5%)。(3)PCDH8启动子甲基化与其蛋白表达缺失显著相关。在正常肝组织的组织切片中,43/50例检测到PCDH8蛋白的表达。然而在50例肝癌组织(42例HCC,8例CC)中,有42例PCDH8蛋白的表达缺失,并且其中的40例发生PCDH8基因启动子甲基化。因此PCDH8启动子发生甲基化时,其蛋白表达往往缺失,启动子甲基化与其蛋白表达缺失存在着显著相关关系,差异具有统计学意义(P=0.004)。(4)肝癌组织中PCDH8的异常的甲基化状况与甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)水平显著相关(P=0.008)。肝癌中PCDH8基因启动子甲基化和其他临床病理特征,如年龄、性别、肿瘤的大小、肿瘤的分化程度等均没有显著相关关系(P>0.05)。(5)肝癌病例中发生PCDH8甲基化的患者,其总体中位生存时间为15个月,而PCDH8未甲基化患者往往预后较好(该组患者在随访结束时均存活),两组差异经统计学分析P=0.041,具备差异意义。此外,肿瘤大小、肿瘤分化和AFP水平也与肝癌患者的生存时间相关。COX分析显示PCDH8甲基化可能不是一个独立的影响预后的因子(P>0.05),同样肿瘤的大小、肿瘤的分化程度也不是独立的预测因子(P>0.05)。多因素Cox比例分析显示,只有AFP水平这一项指标可以作为一个独立的肝癌预后因子。结论:肝癌中PCDH8存在着较高的甲基化率,而且PCDH8往往因为基因启动子的甲基化而失活,其蛋白表达受到启动子甲基化的调控。PCDH8基因启动子甲基化在肝癌的发生发展过程中起到了非常重要的作用,可以作为一个有价值的诊断生物标志物用于早期发现肝癌以及预测临床不良预后。肝癌组织中PCDH8的异常甲基化状态与AFP水平显著相关。肝癌中PCDH8未甲基化患者往往预后较好,但PCDH8可能不是一个独立的影响预后的因子,只有AFP水平可以作为一个独立的预后因素。