Wnt蛋白与位于细胞膜上的受体Frizzled(Fzd)相结合，激活细胞内信号通路，调节靶基因的表达，在胚胎的发育过程中有重要的作用。最近研究又表明Wnt家族分子与脂肪代谢有密切关系，本试验应用RNAi的方法研究Wnt家族中的Wnt5b和受体Fzd4在脂肪代谢中的作用。 3T3-L1细胞是研究脂肪细胞分化的细胞模型。用RT-PCR的方法检测Wnt家族分子在3T3-L1脂肪生成过程中表达水平的变化，其中Wnt5b在脂肪细胞分化后期表达水平明显升高，受体分子Fzd4在脂肪生成过程中表达量比较高。因此，应用RNAi技术特异的抑制Wnt5b基因和Fzd4基因在3T3-L1细胞中的表达。由于3T3-L1细胞的转染效率非常低，所以，将RNAi载体与相应基因共转染效率很高的293T细胞，选出有效的RNAi靶序列，再将其转染3T3-L1细胞观察在脂肪分化过程中的作用。 设计Wnt5b和Fzd4基因各两条持异性序列的62bp寡核苷酸片段，将此片段构建到含有Hl启动子并具有绿色荧光蛋白的逆转录病毒载体pQsupR/F中，将构建的RNAi载体与相应基因共转染293T细胞，以免疫印迹检测转染后相应基因在细胞中的表达水平。结果两种Fzd4不同特异性序列的RNAi质粒转染后均能干扰该基因在细胞中的表达。一种Wnt5b特异性序列的RNAi质粒转染后能干扰该基因在细胞中的表达。将选出的RNAi的载体转染Phenoix细胞包装成逆转录病毒。收集含逆转录病毒的Phenoix细胞的上清感染3T3-L1细胞，油红O染色，用异丙醇将染料提取出来立刻放到490nm的可见光波长下，读取OD值检测吸光率。结果转染Fzd4基因的RNAi质粒的3T3-L1细胞的脂肪滴增多，初步表明Fzd4可能抑制了脂肪的生成。转染Wnt5b基因对应的RNAi质粒的3T3-L1细胞的脂肪滴减少了，初步表明Wnt5b可能有促进脂肪生成的功能。 另外，将Wnt5b和Wnt9a进行了原核表达，制作了Wnt5b蛋白的多克隆抗体。