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背景与目的： 辅助生殖技术中，为获得足够的卵母细胞，外源性促性腺激素被广泛应用，部分病人需要多次促排卵以获得活产胎儿。研究表明外源激素的使用对卵母细胞质量有不利影响，如非整倍性增加等。对动物的研究表明高剂量外源激素对卵母细胞DNA甲基化建立有不利影响，而低剂量外源促性腺激素对卵母细胞DNA甲基化没有明显影响。但低剂量多次超数排卵是否会影响卵母细DNA甲基化修饰却并不清楚。本研究以反复超排小鼠为模研究低剂量多次超排对卵母细胞印记基因的DNA甲基化水平的影响及可能机制。 材料和方法： 采用健康6周龄CD-1小鼠30只进行实验，实验组和对照组各15只，随机分配。实验组分为：R1：超排1次组，腹腔注射PMSG8IU/只，48小时后注射8IU HCG；R3:超排3次组，每隔1周超排1次，连续超排3次，超排方法如R1；R5：超排5次组，每隔1周超排1次，连续超排5次。对照组为C1、C3、C5分别注射等体积的生理盐水。 运用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis，COBRA)分析卵母细胞印记基因DNA甲基化水平，运用Q-PCR绝对定量分析颗粒细胞线粒体copy,相对定量分析线粒体编码的电子呼吸传递链基因的mRNA水平并检测了卵巢指数，同时监测小鼠的发情周期运用免疫组化检测原始卵泡所占比例，并行卵母细胞体外成熟检测第一极体排出率。 结果： 1、随超排次数的增加，父源印记基因H19的甲基化水平并未发生改变，母源印记基因Peg3的甲基化水平下降。 2、随促排次数的增加，线粒体的copy数下降。 3、核编码的DNA聚合酶mRNA和第2外显子DNA甲基化水平检测发现：R1、R5 PolgA的DNA甲基化水平略低于R3,颗粒细胞PolgAmRNA表达水平的变化与DNA甲基化水平的变化是一致的。 4、反复超排改变了颗粒细胞线粒体编码的氧化呼吸相关基因COX1、CYTB、 ND2、ND4的表达。 5、随着促排次数的增加，小鼠的卵巢指数增加。其中R5和C5，R1和C1相比，有显著性差异（P<0.05）R5和R1促排相比，也有显著差异（P<0.05）。随着促排次数的增加，原始卵泡比例下降,小鼠的卵巢储备功能下降，对照组各组之间无统计学差异，R5和C5相比，也有显著性差异（P<0.05），实验组R3和R1，R3和R5有显著差异（P<0.05）；随着促排次数的增加，各对照组和实验组小鼠卵母细胞的第一极体排出率也是下降的，随促排次数的增加，实验组的第一极体排出率低于对照组，但无统计学差异。 结论： 随促排次数的增加，小鼠颗细胞线粒体功能改变可能是导致卵母细胞的DNA甲基化水平降低的原因，同时小鼠的卵巢指数增加，储备功能下降，卵母细胞成熟率下降。