乙肝表面抗原PreS1区有关片段的基因克隆、表达及其应用研究

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fliedpig
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大分子乙肝表面抗原的前S1(PreS1)区域在乙肝病毒的装配和感染中起着重要作用,PreS1与病毒复制正相关.该文克建了含不同拷贝数PreS1(21-47aa)DNA片段与GST的融合表达质粒pGEXSI与pGEXSII,它们在E.Coli中可溶性目的蛋白表达量分别达20和50mg/L.以PreS1(21-47aa)融合蛋白为包被抗原建立了抗PreS1抗体检测的间接ELISA和竞争ELISA法,并对近百名乙肝患者血清标本进行了检测.该文以重组表达的PreS1(21-119aa)蛋白替代PreS1(21-47aa)融合蛋白,并对ELISA中的封闭液,稀泽液和底物配方等作了改进,一定程度上克服了原间接ELISA的阳性读数值较低的缺点,但非特异性反应强的问题依然存在.为了解决这一问题,该文又建立了生物素标记的A蛋白和HRP标记的链霉亲和素为基础的抗PreS1抗体检测ELISA法,并对方法的灵敏度,专一性,重复性和稳定性等作了分析.为明确抗PreS1抗体检测的临床意义,采用改进后的ELISA,对部分患者进行了为期半年的随访.论文最后对抗PreS1(21-47aa)单抗125E11的独特型抗体的制备作了探索.
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