通过树鼩乙肝动物模型观察新生树鼩感染HBV后相关免疫因子TLr-4和IL-6的动态变化

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cutemaomao
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:通过对新生树鼩接种中、高滴度的人HBV血清,建立树鼩乙肝动物模型;观察树鼩感染HBV后体内相关免疫因子TLR-4和IL-6的动态变化,初步探讨HBV感染的免疫机制。  方法:第一部分用中、高滴度的人HBV血清接种新生树鼩,建立新生树鼩乙肝动物模型。将新生树鼩随机分组,中滴度组接种含人HBV血清(104-106IU/ml),高滴度组接种含人HBV血清(107IU/ml),对照组不接种。从接种后第8周开始,每隔2周经股静脉采血1次,接种后12周开始,每3个月行肝活检术取肝组织。ELISA法检测血清中HBsAg的表达,荧光定量PCR(探针法)检测肝组织与血清中HBVDNA含量,免疫组化观察肝组织中HBsAg表达情况。第二部分观察成功感染HBV的动物体内TLR-4与IL-6的动态变化。将第一部分实验中HBsAg和(或)HBVDNA阳性树鼩确定为感染组,6只未接种且经检测HBsAg和HBVDNA均为阴性的树鼩为对照组。ELISA检测两组动物血清中TLR-4与IL-6的表达情况,荧光定量PCR检测两组动物肝组织中TLR-4与IL-6的mRNA水平表达情况,免疫组化法观察两组动物肝组织中TLR-4与IL-6的表达情况。  结果:第一部分共有34只新生树鼩接种人HBV血清,高滴度组(107IU/ml)与中滴度组(104、105、106IU/ml)各17只动物。结果如下:①血清HBsAg结果:在观察期内(8周~24周)高滴度组共检测到8只动物出现HBsAg阳性(8/17,47.05%),中滴度组和对照组的HBsAg均为阴性。在8只阳性的动物中,有7只动物在第8周即可检测出HBsAg阳性,1只动物在22周第一次检测到HBsAg阳性,且其中5只动物在整个观察期内(8周~24周)HBsAg持续阳性,最长可持续到第48周。②血清HBVDNA结果:按照临床检验标准,将HBVDNA≥500IU/ml定为阳性标准。在观察期内(8周~24周),高滴度组有11只动物血清检测出HBVDNA阳性(11/17,64.7%),中滴度组有5只可检测出HBVDNA,但其拷贝数均低于阳性标准,对照组血清HBVDNA均为阴性。大部分阳性动物在第8周即可检测出,持续时间最短14周最长可达72周。11只阳性动物HBVDNA水平多在103IU/ml左右,少数可达到104IU/ml,随时间的延长,HBVDNA载量逐渐下降。③肝组织HBVDNA结果:高滴度组12周与24周肝组织检测都有12只动物出现HBVDNA阳性(12/17,70.5%);中滴度组在第12周有5只检测出HBVDNA阳性(5/17,29.4%),24周有3只检测出HBVDNA阳性(3/17,17.6%),对照组肝组织未检测出HBVDNA阳性。高滴度组阳性动物HBVDNA水平多在103~104IU/ml左右,少数可达到105IU/ml,中滴度组阳性动物HBVDNA水平多在103IU/ml左右。④免疫组化结果显示,高滴度组与中滴度组大部分动物肝组织HBsAg呈阳性表达,高滴度组肝组织HBsAg阳性动物为12只(12/17,70.5%),中滴度组肝组织HBsAg阳性动物为5只(5/17,29.4%),对照组染色均为阴性。阳性染色物为棕黄色,主要表达于肝细胞浆和细胞膜。第二部分将第一部分实验中12只HBsAg和(或)HBVDNA阳性树鼩确定为感染组,6只未接种且经检测HBsAg和HBVDNA均为阴性的树鼩为对照组。两组动物体内TLR-4与IL-6检测结果如下:①ELISA检测感染组与对照组血清中TLR-4结果显示,感染组动物血清中TLR-4的表达在第8w、12w、16w、20w、24w均比对照组高,差异均有统计学意义(p<0.05),随时间的延长,血清TLR-4的表达呈降低趋势。感染组动物血清中IL-6的表达在8w、12w、16w、20w、24w均比对照组高,在第8w、12w、16w有显著性差异(p<0.05),随时间的延长,血清中IL-6表达稍有下降。②qRT-PCR检测树鼩肝组织中TLR-4、IL-6mRNA的表达结果显示,感染组TLR-4mRNA在12周、24周肝组织中的表达水平均比对照组高,差异均具有统计学意义(p<0.05);感染组IL-6mRNA在12周、24周肝组织中的表达水平均比对照组高,第12周有显著性差异(p<0.05)。③免疫组化观察TLR-4在感染组中阳性表达率为(10/12,83.3%),在对照组中阳性表达率为(1/6,16.6%),感染组与对照组间差异具有统计学意义(p<0.05)。IL-6在感染组中阳性表达率为(9/12,75%),在对照组中阳性表达率为(1/6,16.6%),感染组与对照组间有显著性差异(p<0.05)。  结论:1.高滴度(107IU/ml)的人HBV血清可提高树鼩血清HBsAg和HBVDNA的阳性率,并能在一定程度上延长HBsAg和HBVDNA阳性持续时间,相较于中滴度HBV血清更有利于建立树鼩乙肝动物模型。2.HBV感染组树鼩血清与肝组织中TLR-4与IL-6的表达均高于正常组树鼩,提示树鼩感染HBV过程中先天免疫与特异性免疫共同发挥作用,TLR-4与IL-6在树鼩HBV感染过程中发挥一定免疫作用。
其他文献
创造性思维的实质就是思维活动中选择、突破和重新建构这三者的有机统一.有人说创造是从无到有,引出一个新的对象世界.选择是解开人类思维创造之谜的第一把钥匙.人的创造活动
阿笨:新的一年到啦,吹牛公司在《奇趣世界》开了一家分公司,欢迎小牛皮们光临!为了答谢新老牛皮们对我的喜爱(吹总:咳咳,是我们),特邀小张同学为大家下一场钞票雨!只听张时雨
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
顾明远作为国际教育理论界的著名专家,桃李满天下,享誉海内外.他是江苏江阴人,北京师范大学教育管理学院院长、博导.1956年毕业于苏联列宁师范学院教育系,曾任世界比较教育学
尽快实现两个转变,实现今后的奋斗目标,最根本的是加强和改善党的领导,加强各级领导班子建设,提高各级领导干部的素质和水平。江泽民总书记最近指出,“在干部中首先是领导干
1995年7月1日.在黑龙江省大庆市委表彰的先进党组织的名单中,上面写着肇州县丰乐镇幸安村党支部。这个党支部之所以获此殊荣,与村党支部书记李忠海是密不可分的。1989年春天
我们班有个大力士,他叫韦圣凯。别看他平时一副懒洋洋的样子,他的力气可大着呢!  在去年学校举行的拔河比赛中,韦圣凯因为生病没有参加,猛将缺席,我们班得了倒数第一。今年的拔河
从开学的第一周起,我们就开始准备各项抽考。我的主攻科目是体育,虽然体育是我的强项,但是其中一个项目的考试却让我心惊胆战。
小创:近年来,许多影视剧都会在一些风景秀丽的旅游地取景拍摄,尤其是古装武侠剧,优美的风景会让整个画面看起来相当唯美,这也让一些原本不怎么受关注的旅游景点一下子火了起