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目的:通过对新生树鼩接种中、高滴度的人HBV血清,建立树鼩乙肝动物模型;观察树鼩感染HBV后体内相关免疫因子TLR-4和IL-6的动态变化,初步探讨HBV感染的免疫机制。 方法:第一部分用中、高滴度的人HBV血清接种新生树鼩,建立新生树鼩乙肝动物模型。将新生树鼩随机分组,中滴度组接种含人HBV血清(104-106IU/ml),高滴度组接种含人HBV血清(107IU/ml),对照组不接种。从接种后第8周开始,每隔2周经股静脉采血1次,接种后12周开始,每3个月行肝活检术取肝组织。ELISA法检测血清中HBsAg的表达,荧光定量PCR(探针法)检测肝组织与血清中HBVDNA含量,免疫组化观察肝组织中HBsAg表达情况。第二部分观察成功感染HBV的动物体内TLR-4与IL-6的动态变化。将第一部分实验中HBsAg和(或)HBVDNA阳性树鼩确定为感染组,6只未接种且经检测HBsAg和HBVDNA均为阴性的树鼩为对照组。ELISA检测两组动物血清中TLR-4与IL-6的表达情况,荧光定量PCR检测两组动物肝组织中TLR-4与IL-6的mRNA水平表达情况,免疫组化法观察两组动物肝组织中TLR-4与IL-6的表达情况。 结果:第一部分共有34只新生树鼩接种人HBV血清,高滴度组(107IU/ml)与中滴度组(104、105、106IU/ml)各17只动物。结果如下:①血清HBsAg结果:在观察期内(8周~24周)高滴度组共检测到8只动物出现HBsAg阳性(8/17,47.05%),中滴度组和对照组的HBsAg均为阴性。在8只阳性的动物中,有7只动物在第8周即可检测出HBsAg阳性,1只动物在22周第一次检测到HBsAg阳性,且其中5只动物在整个观察期内(8周~24周)HBsAg持续阳性,最长可持续到第48周。②血清HBVDNA结果:按照临床检验标准,将HBVDNA≥500IU/ml定为阳性标准。在观察期内(8周~24周),高滴度组有11只动物血清检测出HBVDNA阳性(11/17,64.7%),中滴度组有5只可检测出HBVDNA,但其拷贝数均低于阳性标准,对照组血清HBVDNA均为阴性。大部分阳性动物在第8周即可检测出,持续时间最短14周最长可达72周。11只阳性动物HBVDNA水平多在103IU/ml左右,少数可达到104IU/ml,随时间的延长,HBVDNA载量逐渐下降。③肝组织HBVDNA结果:高滴度组12周与24周肝组织检测都有12只动物出现HBVDNA阳性(12/17,70.5%);中滴度组在第12周有5只检测出HBVDNA阳性(5/17,29.4%),24周有3只检测出HBVDNA阳性(3/17,17.6%),对照组肝组织未检测出HBVDNA阳性。高滴度组阳性动物HBVDNA水平多在103~104IU/ml左右,少数可达到105IU/ml,中滴度组阳性动物HBVDNA水平多在103IU/ml左右。④免疫组化结果显示,高滴度组与中滴度组大部分动物肝组织HBsAg呈阳性表达,高滴度组肝组织HBsAg阳性动物为12只(12/17,70.5%),中滴度组肝组织HBsAg阳性动物为5只(5/17,29.4%),对照组染色均为阴性。阳性染色物为棕黄色,主要表达于肝细胞浆和细胞膜。第二部分将第一部分实验中12只HBsAg和(或)HBVDNA阳性树鼩确定为感染组,6只未接种且经检测HBsAg和HBVDNA均为阴性的树鼩为对照组。两组动物体内TLR-4与IL-6检测结果如下:①ELISA检测感染组与对照组血清中TLR-4结果显示,感染组动物血清中TLR-4的表达在第8w、12w、16w、20w、24w均比对照组高,差异均有统计学意义(p<0.05),随时间的延长,血清TLR-4的表达呈降低趋势。感染组动物血清中IL-6的表达在8w、12w、16w、20w、24w均比对照组高,在第8w、12w、16w有显著性差异(p<0.05),随时间的延长,血清中IL-6表达稍有下降。②qRT-PCR检测树鼩肝组织中TLR-4、IL-6mRNA的表达结果显示,感染组TLR-4mRNA在12周、24周肝组织中的表达水平均比对照组高,差异均具有统计学意义(p<0.05);感染组IL-6mRNA在12周、24周肝组织中的表达水平均比对照组高,第12周有显著性差异(p<0.05)。③免疫组化观察TLR-4在感染组中阳性表达率为(10/12,83.3%),在对照组中阳性表达率为(1/6,16.6%),感染组与对照组间差异具有统计学意义(p<0.05)。IL-6在感染组中阳性表达率为(9/12,75%),在对照组中阳性表达率为(1/6,16.6%),感染组与对照组间有显著性差异(p<0.05)。 结论:1.高滴度(107IU/ml)的人HBV血清可提高树鼩血清HBsAg和HBVDNA的阳性率,并能在一定程度上延长HBsAg和HBVDNA阳性持续时间,相较于中滴度HBV血清更有利于建立树鼩乙肝动物模型。2.HBV感染组树鼩血清与肝组织中TLR-4与IL-6的表达均高于正常组树鼩,提示树鼩感染HBV过程中先天免疫与特异性免疫共同发挥作用,TLR-4与IL-6在树鼩HBV感染过程中发挥一定免疫作用。