1 禽流感病毒H5、H9亚型血凝素单克隆抗体的制备和鉴定 用禽流感病毒（AIV）H5、H9亚型油乳剂灭活疫苗腹部皮下多点注射免疫8w龄雌性BALB／c小鼠，0.2ml／只。共免疫3次，末次加强免疫以纯化病毒100μg/只尾静脉注射，3d后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2／0-Ag-14进行融合。以间接ELISA和HI试验反复筛选阳性克隆，并经有限稀释法3次亚克隆，共获得3株抗AIV H9亚型血凝素（HA）mAbs，分别命名为2H1、2A3、1C8；获得3株抗AIV H5亚型mAbs，分别命名为2G2、5C3、6F6。 抗AIV H9亚型3株mAbs 2H1、2A3和1C8的腹水ELISA效价分别为1×10⁷、1×10⁵和5×10⁶，HI效价为1×2⁸～1×2¹³；3株mAbs Ig亚类均为IgG₁。Western-blot分析结果显示，mAb 2H1能与AIV H9亚型的75 KD蛋白条带起反应，表明该mAb特异性识别AIV H9亚型HA。与AIV H9亚型国内分离株HI试验反应性结果，表明mAb 2H1具有良好的广谱性。 抗AIV H5亚型3株mAbs 2G2、5C3和6F6的腹水ELISA效价分别为6×10⁶、8×10⁵和6×10⁶，其中mAb 2G2和6F6具有HI活性，其HI效价分别为1×2¹²、1×2¹⁰；3株mAbs Ig亚类分别为IgG_2a、IgG₁和IgG₁。 本研究成功研制出抗AIV H9和H5亚型HA的mAb，为AIV的抗原性分析、血清学诊断、疫苗质量监测及流行病学调查等提供了条件。 2 双抗体夹心ELISA检测H9亚型禽流感病毒方法的初步建立扬州大学硕士学位论文 联合应用mAb 2HI和鸡抗AIV多克隆抗体，初步建立了双抗体夹心ELISA方法，用于检测AW Hg亚型。经方阵试验确定，鸡多克隆抗体包被稀释度为1:6400，mAb 2HI腹水最佳稀释度为1:8 000作为工作浓度。经特异性试验、人工干扰试验和灵敏性试验，表明该方法特异性强、灵敏度高，预示其有着良好的应用前景。