不同温度下安吉白茶差异表达基因的分离、鉴定及CsPDS3基因的功能研究

被引量 : 15次 | 上传用户:zhuce121566
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
安吉白茶是一低温诱导白化的特异茶树品种,早春时节低温条件下其叶片具有阶段性返白-复绿现象。本文第一部分,通过人工模拟15℃、19℃、23℃三个不同环境温度培养安吉白茶,选取各温度下性状特征最明显的芽下第二叶为材料,研究温度对光合作用相关色素、叶绿体超微结构以及基因表达的影响;同时通过qRT-PCR技术,检测了不同温度下生长的安吉白茶叶片中质体发育早期阶段相关基因、光合作用系统相关基因以及类胡萝卜素生物合成途径中关键酶基因的表达水平。第二部分,应用Gateway技术体系构建了茶树类胡萝卜素合成途径中关键酶基因—八氢番茄红素脱氢酶3基因(Camellia Sinensis Phytoene Desaturase3,CsPDS3)的RNAi载体,并将其转入根癌农杆菌GV3101;探索了农杆菌渗入法(Agroinfiltration)在茶树基因功能研究中的可行性,并利用该方法初步研究了CsPDS3基因功能。本文主要研究结果如下:1.选取不同温度下性状特征最明显的安吉白茶芽下第二叶为材料,以常规茶树品种福鼎大白茶作为对照,研究温度对光合作用相关色素及叶绿体超微结构的影响。结果表明,安吉白茶叶片叶绿素和p-胡萝卜素含量随着温度的上升而增加,叶绿体在15℃和19℃条件下发育异常。2.应用cDNA-AFLP技术,结合银染方法,分析三个培养温度条件下安吉白茶差异表达基因。选取其中85个重复性好的差异条带,进行回收、测序及Blastx比对,结果有40条差异条带比对出同源序列。根据Blastx比对结果,可分为以下几类:物质及能量代谢,次生代谢,抗性相关,细胞结构蛋白及细胞周期,蛋白代谢,转录因子,信号转导,功能未知。另有45条TDFs未找到同源序列。3.通过qRT-PCR技术,检测了不同温度下生长的安吉白茶叶片中质体发育早期阶段相关基因、光合作用系统相关基因以及类胡萝卜素生物合成途径中关键酶基因的表达水平。结果表明,质体发育早期阶段和儿茶素合成相关基因在19℃条件下表达最高,光合作用系统相关基因以及类胡萝卜素生物合成途径中关键酶基因大部分随着温度的升高而表达上调。4.根据cDNA-AFLP分离得到的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶基因(bsu-protein phosphatase)片段,采用Primer Premier5.0软件设计扩增两端的特异引物,并通过SMART-RACE技术分别扩增出其3’和5’末端序列,成功获得该基因全长cDNA序列(GenBank登录号JN255182),并命名为茶树CsBsul基因。所得序列全长3166bp,其开放阅读框编码888个氨基酸,蛋白分子量约为97358.3Da。该基因的氨基酸序列与葡萄、杨梅、蓖麻、马铃薯、番茄、拟南芥中的Bsul基因编码的氨基酸序列分别有88%、87%、86%、85%、85%、79%的同源性。茶树丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆为进一步了解茶树油菜素内酯(BRs)的信号转导奠定了基础。5.根据CsPDS3(Camellia sinensis phytoene desaturase3, CsPDS3) cDNA片段(GenBank登录号KC955235)设计引物,通过SMART-RACE技术分别扩增出其3’和5’末端序列,成功获得该基因全长cDNA序列(GenBank登录号KC915039),并将其命名为CsPDS3基因。所得序列全长2326bp,其开放阅读框编码582个氨基酸,蛋白分子量约为64954.9Da。该基因推测的氨基酸序列与葡萄柚、柿子、菊花、葡萄、拟南芥、杏、苦瓜、木瓜、本氏烟、南瓜的相似性分别为87%、86%、85%、84%、84%、84%、82%、82%、82%、81%。CsPDS3基因的全长克隆为进一步研究安吉白茶的白化机理奠定了基础。6.应用Gateway技术体系构建了茶树CsPDS3基因的RNAi载体,经PCR和DNA测序获得验证,并将其转入根癌农杆菌GV3101。7.探索了农杆菌渗入法在茶树基因功能研究中的可行性,并通过该方法初步研究了类胡萝卜素合成途径中CsPDS3基因的功能,并成功得到转基因茶树白化叶片。
其他文献
介绍了CIMT’95上国内外折弯机参展商及其产品,论述了折弯机技术的发展趋势,并根据国情,提出了发展折弯机技术的建议。
近年来,计算机技术和分析金属板料成形过程的有限元理论得到了快速发展,这使得应用于金属流动过程的模拟仿真在降低实验成本,缩短研制周期,提高模拟结果可信度以及改善产品质
从互动电视系统并发流的概念入手,分析影响并发流的相关因素。再以信号码流介绍及码流选择为基础,介绍了并发流的数量、覆盖用户数、接入用户数以及相关投入概算。
在正定隆兴寺大悲阁之东耳阁御书廊下悬置一明代铜钟,原为崇因寺毗卢殿的铜钟,通高146厘米,系明万历四十三年(1615年)御马监太监何朝造。此钟铸造精美,声音洪亮悠扬,所铸铭文
运用三维软件UG对挂钩件进行三维建模,并转换到DYNAFORM软件中建立其有限元模型。通过数值模拟计算出毛坯外形尺寸,不需要几何数学知识,通过给定搭边值及毛坯布置的角度范围,
目前关于塑料薄膜用防滑涂料的研究很少,且市场上的防滑涂料大多数采用的是有机溶剂,施工时挥发造成环境污染问题,因此水性涂料是防滑涂料的发展方向之一。防滑涂料主要由树脂、
这几年来,我国的食品安全事故频发,引起了世人的极大关切,甚至成为各大媒体关注的焦点。如此严重的食品安全问题倒逼中国政府建立更为完善的食品安全法律保护体系,尤其是刑法
产业政策法律制度由产业组织法律制度、产业结构法律制度、产业技术法律制度和产业布局法律制度共同构成,其包含市场准入制度、扶持制度、监管制度和退出制度。产业政策法律
《大唐易州刺史田公德政之碑》现立于保定市的古莲花池内,是莲池收藏的年代最早、书法价值最高的碑刻,近年《河北金石辑录》、《古莲池碑刻萃集》、《保定名碑》等书籍先后载
目前高校管理趋于系统化,各种系统化的程序普遍应用,涉及学生、教学等诸多方面,然而这些系统化的程序并不完全兼容,尤其是在数据交换和更新方面存在接口问题,各系统的设计独立、采