子痫前期(pre-eclampsia，PE)是导致孕产妇和围产儿发病率及死亡率明显增加的妊娠相关疾病。目前PE的病因和发病机制仍未明确，尚无有效的预防和治疗方法，临床上只能通过对症治疗或终止妊娠来控制病情发展，孕产妇及围产儿预后较差。因此，急需进行PE发病机制的研究，为该病的防治提供一定的理论依据。　　MicroRNA(miRNA)是一类广泛存在的小分子非编码RNA，它通过碱基互补配对的方式与靶基因结合，在转录后水平抑制靶基因的表达，从而参与基因的表达调控。miRNA广泛参与生物体内的发育、增殖、分化、衰老、凋亡等众多病理生理过程。近年来，miRNA在子痫前期发病过程中发挥的作用引起了广泛关注，研究表明，PE患者外周血及胎盘组织中存在许多差异性表达的miRNA分子，可能通过调控其下游靶基因的表达参与PE的发生、发展。Wang等研究发现microRNA-17(miR-17)在PE患者胎盘组织中呈病理性高表达，提示其可能与PE发病相关。研究认为滋养细胞凋亡在子痫前期发病中起重要作用，细胞凋亡失衡可导致其对子宫螺旋小动脉的侵袭能力异常。髓细胞白血病因子1(myeloid cell leukemia-1，MCL-1)是Bcl-2家族中重要的抗凋亡蛋白之一，其表达异常可能参与PE发病过程。Kumar等研究发现结核分枝杆菌感染的巨噬细胞中miR-17-5p（miR-17剪切后的一种成熟形式）通过调控MCL-1的表达发挥作用，提示MCL-1可能是miR-17-5p的靶基因之一，但其在子痫前期中的作用鲜有报道。因此，本研究拟通过检测PE患者与正常妊娠孕产妇外周血和胎盘组织中miR-17-5p、MCL-1的表达情况，同时运用相关性分析、生物信息学方法和体外细胞实验初步分析miR-17-5p与MCL-1的相关性，探讨miR-17-5p与MCL-1在子痫前期发生发展中的作用及机制，为深入研究PE的发病机制奠定基础。　　本文主要分为以下几个部分:　　第一章:miR-17-5p在子痫前期中的表达及作用研究　　目的:　　初步了解miR-17-5p在子痫前期患者与正常妊娠孕产妇外周血、胎盘组织中的表达情况，分析miR-17-5p表达水平与孕产妇临床特征及妊娠结局的相关性。　　方法:　　选取40例子痫前期孕妇(PE组，其中轻度PE20例，重度PE20例)和20例正常妊娠孕妇（对照组）为研究对象。逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测研究对象外周血、胎盘组织中miR-17-5p的表达水平，比较各组孕产妇miR-17-5p的表达差异，并分析miR-17-5p表达量与孕产妇临床特征及妊娠结局的相关性。　　结果:　　1.一般资料比较：PE组与对照组孕妇的年龄、孕次、产次、孕前BMI比较，差异均无统计学意义(P＞0.05);PE组收缩压、舒张压均高于对照组，而分娩孕周、新生儿出生体重均低于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。　　2.miR-17-5p表达水平：PE组外周血和胎盘组织中miR-17-5p表达量高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05);轻度PE组和重度PE组的外周血miR-17-5p表达量比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。　　3.外周血miR-17-5p和胎盘miR-17-5p表达水平呈正相关。　　4.miR-17-5p与临床指标的相关性：外周血和胎盘组织中miR-17-5p表达水平与收缩压、舒张压呈正相关，与分娩孕周、新生儿出生体重呈负相关。　　结论:　　1.miR-17-5p在PE患者的外周血和胎盘组织中表达均显著增高，表明miR-17-5p高表达可能参与PE发病过程。　　2.外周血和胎盘组织中miR-17-5p表达量呈正相关，提示血循环中miRNA的表达水平可以较好地反映胎盘组织中该miRNA的表达。　　3.miR-17-5p表达量与血压、妊娠结局均密切相关，提示miR-17-5p表达水平在一定程度上可反映疾病严重程度和临床预后。　　第二章:MCL-1与子痫前期的相关性研究　　目的:　　1.了解MCL-1在子痫前期组与对照组孕产妇外周血、胎盘组织中mRNA和蛋白表达差异，并分析其与子痫前期的相关性。　　2.研究母体外周血MCL-1基因rs9803935和rs3738485两个位点单核苷酸多态性与子痫前期的相关性，探讨母体MCL-1基因多态性与子痫前期发病的关系。　　方法:　　1.收集第一章中研究对象的外周血和胎盘组织，采用RT-qPCR和免疫组化法检测各组孕产妇外周血和胎盘组织中MCL-1mRNA及蛋白表达水平，比较各组MCL-1的表达差异，并分析MCL-1表达水平与临床指标的相关性。　　2.选取子痫前期患者和正常妊娠孕妇各147例，采用SNaPshot技术检测两组孕妇外周血中MCL-1基因rs9803935位点和rs3738485位点的基因分型，比较两组各位点的基因型频率和等位基因频率差异。　　结果:　　1.MCL-1表达水平：与对照组比较，PE组外周血和胎盘组织中MCL-1mRNA和蛋白表达水平均明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。　　2.外周血MCL-1和胎盘MCL-1mRNA表达量呈正相关，表明MCL-1在外周血及胎盘组织中的表达水平具有一致性。　　3.MCL-1与临床指标的相关性：外周血和胎盘组织中MCL-1的表达水平与收缩压、舒张压呈负相关，与分娩孕周、新生儿出生体重呈正相关。　　4.MCL-1基因rs9803935和rs3738485位点多态性　　(1)MCL-1基因rs9803935位点的GG、GT、TT基因型在对照组中的频数分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P＞0.05)，但该位点的基因型频率和等位基因频率在对照组和PE组中差异均无统计学意义(P＞0.05)。　　(2)MCL-1基因rs3738485位点的基因型频数分布不符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P＜0.05)，未进行后续分析。　　结论:　　1.PE组外周血和胎盘组织中MCL-1在mRNA和蛋白水平均低于对照组，表明MCL-1低表达可能参与PE的病理生理过程。　　2.MCL-1表达水平与临床指标的相关性提示MCL-1水平对子痫前期的病情及预后评估具有一定意义。　　3.PE组和对照组外周血MCL-1基因rs9803935位点的基因型和等位基因频率无显著性差异，提示该位点基因多态性可能与PE遗传易感性无关联，而MCL-1基因rs3738485位点的基因型分布不符合Hardy-Weinberg平衡，可暂不考虑该位点基因多态性与妊娠人群疾病易感性的相关性研究。　　第三章:miR-17-5p与MCL-1的相关性研究　　目的:　　预测miR-17-5p的靶基因，探讨miR-17-5p与MCL-1在表达水平和靶向调控方面的相关性。　　方法:　　1.应用五种miRNA靶基因预测软件进行miR-17-5p与MCL-1靶向调控关系的初步验证。　　2.分析各组孕产妇外周血及胎盘中miR-17-5p与MCL-1表达水平的相关性。　　3.采用miRNA过表达与抑制技术在人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞中，过表达与抑制miR-17-5p后，RT-qPCR法与免疫荧光技术分别检测HTR-8/SVneo细胞中MCL-1mRNA和蛋白水平，分析miR-17-5p与MCL-1在表达水平的靶向调控关系。　　结果:　　1.靶基因预测结果显示MCL-1为miR-17-5p的理论靶基因之一。　　2.孕产妇外周血及胎盘中的miR-17-5p表达水平与MCL-1表达量呈负相关。　　3.在HTR-8/SVneo细胞中，过表达miR-17-5p可显著抑制MCL-1的表达水平，而抑制miR-17-5p后MCL-1的表达量明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，表明在HTR-8/SVneo细胞中，miR-17-5p对MCL-1的表达具有负向调控作用。　　结论:　　生物信息学分析、相关性分析和体外细胞实验表明MCL-1可能是miR-17-5p的靶基因，miR-17-5p对MCL-1表达水平有明显的负调控作用，提示miR-17-5p可能通过调控MCL-1的表达参与PE的发病过程。