黄瓜(Cucumis sativus L.)是重要的设施栽培作物,设施土壤盐渍化严重制约了黄瓜的生产。microRNA(miRNA)通过作用于靶基因参与调控植物对非生物逆境的抗性。课题组前期通过对高通量测序结果分析,得到了一些在盐胁迫下差异表达的黄瓜miRNAs。本研究在此基础之上,进一步挖掘响应盐胁迫的关键miRNAs的功能。主要结合转基因技术和耐盐性鉴定,筛选出一种或多种在盐胁迫中发挥作用的miRNAs,并且对其响应盐胁迫的机理做初步的探究,为黄瓜耐盐性研究提供参考。本研究主要结果如下:1.结合高通量测序结果和qRT-PCR验证,筛选出miR166和miR319可能响应黄瓜盐胁迫。根据课题组前期测序得到的10种在盐胁迫下差异表达的miRNAs,挑选出和盐逆境相关靶基因作为这些miRNAs预测靶基因。通过qRT-PCR分析miRNA和预测靶基因之间的关系,结果发现在黄瓜的叶片和根尖中,miR166负调控其预测靶基因;在黄瓜根尖中,miR319负调控其预测靶基因。2.获得miR166和miR319的纯合过表达转基因拟南芥。以黄瓜“津春2号”的DNA作为模板,克隆miR166和miR319的前体基因,构建超表达载体转化拟南芥,经过抗性筛选得到了 T3代的纯合转基因拟南芥。3.通过表型、生理、基因水平鉴定,过表达miR166可以提高拟南芥的耐盐能力,过表达miR319在拟南芥幼苗期可以缓解盐胁迫。将wt和转基因拟南芥在不同盐浓度下处理,统计发芽率、子叶绿化比率、根长,发现miR166和miR319转基因拟南芥各项指标均优于wt;300mMNaCl溶液处理拟南芥,转基因拟南芥成活率高于野生型。用200mM NaCl溶液处理拟南芥,miR166和miR319转基因拟南芥的Na+浓度低于wt,K+浓度高于wt。通过检测盐胁迫下拟南芥关键耐盐基因的表达水平,发现在miR166转基因拟南芥的根系HKT1、NHX1、SOS3和AVP1基因,叶片NHX1、SOS1基因表达量相比wt显著提高;miR319转基因拟南芥中叶片NHX1、SOS1基因表达量相比wt显著提高。说明了 miR166和miR319转基因拟南芥的耐盐能力均优于wt拟南芥。4.烟草瞬时转化系统验证Csa7G452940为miR166的靶基因。通过对miR166预测的4种靶基因进行验证,只有在注射了 miR166和Csa7G452940靶位点混合菌液的烟草中,GFP荧光才能消失。说明了 Csa7G452940基因为miR166的靶基因。