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目前,国外关于维甲酸诱导肿瘤细胞凋亡以及维甲酸作用后IV型胶原酶的变化已有报道,但国内却未见报道.本系列实验应用扫描电镜、透射电镜、DNA断裂分析及流式细胞术观察ATRA诱导卵巢癌细胞CAOV3凋亡;应用明胶酶谱法、RT-PCR及Western Blot技术分析ATRA作用卵巢癌细胞凋亡后IV型胶原酶的变化;应用免疫组化方法、Western Blot技术观察IV型胶原酶及其组织抑制物在卵巢肿瘤中的表达及意义.旨在研究IV型胶原酶及其组织抑制物在卵巢肿瘤的发生、发展及侵袭和转移过程中的意义,观察全反式维甲酸能否抑制肿瘤细胞分泌IV胶原酶,最终降低肿瘤细胞的侵袭能力.1.应用透射电镜技术观察ATRA作用人卵巢癌细胞CAOV3后,细胞变圆,表面微绒毛明显减少.RA作用24核内染色质边集,没核膜内侧分布,核膜皱褶内陷.核周片层状内质网较多,可见轻微扩张.RA诱导48h,核染色质更加致密,浓缩分块,胞质中有空泡形成,细胞表面微绒毛消失.RA诱导72h,细胞表面出泡,脱落形成膜包裹的凋亡小体,有些含有固缩的核碎片.结果表明ATRA可以诱导卵巢癌细胞产生细胞凋亡,呈时间和浓度依赖性.2.在观察ATRA诱导人卵巢癌细胞CAOV3细胞凋亡的同时又观察了凋亡过程中IV型胶原酶(MMP-2、MMP-9)的变化.应用明胶酶谱法、RT-PCR技术及Western blot分析ATRA作用卵巢癌细胞72小时后IV型胶原酶的活性变化、MMP-2蛋白及mRNA水平表达.结果表明ATRA诱导卵巢癌细胞凋亡的同时可抑制肿瘤细胞分泌IV型胶原酶,其抑制作用很可能发生于转录水平,支持RA可能通过抑制基质降解来抑制肿瘤细胞侵袭和转移的能力的推论,为进一步研究有效的抑癌药物提供方向.3.金属蛋白酶抑制因子(TIMP)是IV型胶原酶的天然抑制剂并与体内的MMP平衡,为探讨基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及其组织抑制物(TIMP-2)在不同卵巢肿瘤组织中的表达,我们采用免疫组化S-P法及Western blot分别对128例和20例卵巢肿瘤组织的MMP-2、MMP-9及TIMP-2蛋白表达进行研究.Western blot结果表明MMP-2及MMP-9在卵巢恶性肿瘤中的表达明显高于在卵巢良性肿瘤的表达(P<0.01).MMP-2及MMP-9可能在卵巢癌的侵袭和转移中起一定的促进作用,TIMP-2对卵巢癌的侵袭和转移起抑制作用.MMP-2及MMP-9蛋白的高表达可作为判断卵巢癌具有转移倾向的临床参考指标.